ГОСТ Р ИСО 22442-3—2011
В.3.2 Разработка исследования
В.3.2.1 Исследование должно быть разработано таким образом, чтобы наличие вирусов определялось коли
чественным методом с учетом пределов чувствительности проб (см. приложение G).
В.3.2.2 Действенность дезактивации/уничтожения вирусов будет зависеть от структуры, размеров и формы
материала и от их распределения в нем. Исследование должно быть разработано с учетом этого.
В.3.2.3 Количество вируса, добавленного в исходный материал для изучаемой ступени производства, дол
жно быть максимально высоким в целях адекватного определения возможностей производственной ступени. Тем
не менее, объем добавленной взвеси, содержащей вирус, не должен превышать 10 % общего продукта, подвергае
мого специальному добавлению, так что исследуемый образец остается композиционно сходным с производствен
ным материалом Вычисленные коэффициенты сокращения должны быть основаны на вирусе, обнаруживаемом в
исходном материале со специальным добавлением, а не на количестве добавленного вируса.
В.3.2.4 Если возможно, вирус в образцах из модельных экспериментов должен быть титрован без дальней
ших манипуляций, таких как ультрацентрифугирование, диализ или хранение. В случаях, когда дальнейшая обра
ботка неизбежна, например для удаления ипи нейтрализации ингибиторов или токсичных веществ, или для
хранения на определенный период для того, чтобы все образцы были титрованы вместе, необходимо выбрать
со ответствующие контрольные образцы для определения эффекта процедур на результате исследования,
например эффекта разбавления. Влияние образца на систему обнаружения, включая токсические эффекты,
необходимо за регистрировать, так как оно влияет на пределы обнаружения. Хранение вирусов и образцов с
добавленным виру сом следует проводить при заявленных условиях.
В.3.2.5 Когда это возможно, необходимо получить кинетику дезактивации вирусов для измерения угла накло
на кривой и определения теоретического времени, необходимого для дезактивации всей популяции вирусов.
Исследования дезактивации следует планировать таким образом, чтобы пробы забирались в разное время,
позволяя построить график дезактивации. Часто дезактивация вируса имеет быструю начальную фазу, за которой
следует более медленная фаза. Изучение второй фазы особенно важно для определения характеристик процесса
дезактивации (см. В.4.1).
В.3.2.6 В случае уничтожения, т.е. снижения инфицированности вируса путем разделения на преципитаты
или удаления определенных фракций, удаленный образец также должен быть изучен. Необходимо составить ба
ланс распределения вируса в различных фракциях, когда это возможно.
В.3.2.7 Метод пробы количественной инфицированности вирусов должен иметь адекватную чувствитель
ность и воспроизводимость и быть проведен с достаточными репликами и контрольными образцами для гарантии
адекватной статистической точности результата (см. приложение Е).
В.3.2.8 Достоверностьдостигнутогосокращения логарифма должна быть установлена исследованием эффек
та колебания в критических параметрах процесса, использованных для установления пределов внутри процесса.
В.3.3 Выращивание вирусных моделей
Модели вирусов, используемые для утверждения процесса дезактивации, предпочтительно должны быть со
зданы в клеточных культурах, когда таковые доступны. Выбранная система клеточной культуры не должна изме
нять свойства модельного вируса.
В.3.4 Проведение исследований в клеточных культурах
В.3.4.1 Модели вирусов, используемые для подтверждения процессов дезактивации, предпочтительно дол
жны быть испытаны в клеточных культурах. Необходимо использовать модель пермиссивной клетки для испытания
потенциала к дезактивации различных производственных ступеней.
До оценки вирусных титров после дезактивации сначала необходимо оценить наличие какой-либо токсичнос
ти дезактивационных агентов ипи проб процесса на системе клеточной культуры, используемой для выращивания
вируса. Обычно образцы должны быть нейтрализованы или разведены до нетоксичной дозы для анализа в систе
мах клеточных культур.
В.3.4.2 Внутриклеточные вирусы обычно сложнее дезактивировать, чем внеклеточные. Подход с использо
ванием пермиссивной клетки позволяет провести испытание действенности параметров обработки при дезактива
ции как внутриклеточных, так и внеклеточных вирусов
В.3.4.3 Испытание следует продолжать до прекращения извлечения вирулентных вирусов из клеточных
культур, инфицированных избранными модельными вирусами. По возможности необходимо в определенной сте
пени провести пробы антител или иного фактора интерференции в природном агенте на образцах, все агенты кото
рых были предположительно удалены или дезактивированы. В некоторых случаях невозможно отделит» эффект
дезактивации от эффекта интерференции.
В.3.5 Коэффициенты сокращения
B.3.S.1 Задачей исследования является установление ступеней, эффективных для дезактивации и/или
уничтожения вирусов и для измерения общей способности производственного процесса к их дезактивации/удале-
нию. Общий коэффициент сокращения обычно выражают как сумму индивидуальных факторов. Тем не менее, про
стое суммирование отдельных коэффициентов сокращения может не являться обоснованным, особенно в случаях
9