ГОСТ I» 51446-99
9.6.2.2 Техника окрашивания
После фиксации на предметном стекле бактериальной пленки из 18 —24-часовой культуры
или забродившего бульона заливают пленку раствором кристаллического фиолетового (9.6.2.1.1) и
оставляют на одну минуту для протекания реакции.
Стекло в наклонном положении осторожно промывают несколько секунд водой. Наносят на
стекло раствор иода (9.6.2.1.2) и оставляют на 1мин для протекания реакции.
Стекло в наклонном положении осторожно промывают несколько секунд водой.
Стекло в наклонном положении осторожно и непрерывно промывают этанолом (95 %) в
течение не более 30 с до прекращения вымывания фиолетового красителя.
Стекло в наклонном положении осторожно промывают водой для удаления этанола.
Наносят на стекло раствор сафранина (по 9.6.2.1.3) и оставляют на 10 с.
Стекло в наклонном положении осторожно промывают водой.
Высушивают стекло.
9.6.2.3 Оценка результатов
Стекло просматривают под микроскопом (4.12), используя для этого светосильный объектив с
масляной иммерсией. Бактериальные клетки, окрашенные в синий или фиолетовый цвет, относят
к грамположительным (Грам+); другие, окрашенные в цвета от темно-розового до красного, относят
к грамотринательным (Грам-).
У чистых культур некоторых типов бактерий в поле микроскопа могут присутствовать как
грамположительные, так и грамотрнцательные клетки.
Примечание —Плотные скопления клеток могутдавать нетипичную картину окрашивания.
9.6.3 Проба на каталазу
Обнаружение этого фермента, который разлагает перекись (пероксид) водорода (Н20 2) на воду
и кислород, можно проводить, используя бульонную культуру или отдельную колонию на агаровой
среде.
Если в конкретных стандартах на методы испытаний не установлены другие требования, то во
всех случаях питательная среда не должна содержать кровь. Исключение составляет кровь, подверг
шаяся термической обработке (среда с вареной кровыо).
Примечания
1 Некоторыемолочнокислыебактерии при ихкультивировании вотсутствиеглюкозы илиееприсутствии
в низкой концентрации (0.1 %) содержат «иссвдокаталазу». которая нс имеет гемовой группы.
2 В случае анаэробных бактерий перед добавлением перекиси (пероксида) водорода культуру выдержи
вают 30 с на открытом воздухе.
9.6.3.1 Проба на каталазу с бульонной культурой
К 1 см3 культуры добавляют 0.5 см3 раствора перекиси (пероксида) водорода массовой долей
3 %(1 : 10 по объему). Отмечают появление пузырьков кислорода (положительная проба на каталазу)
или их отсутствие (отрицательная проба на каталазу).
9.6.3.2 Проба на каталазу с культурой на агаровой среде
На культуру наносят 1—2 см3 раствора перекиси водорода массовой долей 3 % (I : 10 по
объему). Немедленно, а также через 5 мин наблюдают образование или отсутствие пузырьков
кислорода.
9.6.3.3 Проба на каталазу с колонией
На предметное стекло наносят отдельно две капли раствор перекиси водорода массовой долей
3 % (1 : 10 по объему). Отделяют колонию от среды стерильным стеклом или пластиковой палочкой
(но нс металлической иглой) и осторожно диспергируют ее в одной из капель. Немедленно, а также
через несколько минут (но не менее I мин) отмечают отсутствие или образование
пузырьков кислорода. Всомнительном случае покрывают обе капли предметным стеклом и
сравнивают наличие пузырьков в обеих каплях.
Наблюдения проводят визуально или с помощью микроскопа при малом увеличении.
9.6.4Проба на оксидазу
Обнаружение оксидазы проводят по измерению окрашивания компонентов вследствие окис
ления под действием этого фермента
9.6.4.1 Реактив
9.6.4.1.1 Состав:
N,
j
V,
Л’,’ Л^-Тетраметил-д-фенилендиамин
дигидрохлорид (C,0H|6N2 2HCI)— 1,0 г;
дистиллированная вода— 100 см3.
22