ГОСТ Р 51446-99
- перед обеззараживанием чашки Петри, питательные среды и прочее оборудование, которое
может содержать микроорганизмы, помешают вспециальные контейнеры, затем подвергают мойке;
- перед обеззараживанием или сжиганием по 6.6 одноразовое оборудование помешают в
подходящие контейнеры;
- немедленно удаляют любые брызги зараженных и других продуктов с помощью ватных
тампонов или других подходящих материалов, смоченных 70 %-ным этанолом или другим дезин
фицирующим средством; перед продолжением работы моют и дезинфицируют рабочую поверхность.
Обращение с продуктами, предположительно зараженными патогенными бактериями (Salmo nella,
Listeria monocytogenes и т.д.) или токсинами, требует особых мер предосторожности, которые
приведены в нормативных документах по безопасности проведения работ в микробиологических
лабораториях (например СП 1.2.731). Рекомендуемые меры предосторожности:
- все этапы исследования должны проводиться в стерильном боксе;
- запрещается наполнять пипетки путем засасывания ртом, для этой цели необходимо исполь
зовать резиновую грушу или другое механическое устройство.
Аэрозоли яатяются основной причиной заражения окружающей среды и инфицирования.
Аэрозоли образуются при:
- открытии чашек Петри, пробирок и флаконов:
- использовании смесителей, шприцов, центрифуг и т. д.;
- опорожнении пипеток выдуванием;
- стерилизации петель и игл после влажной инокуляции;
- открытии ампул, содержащих лиофилнзированные культуры микроорганизмов.
9.2 Приготовление исходной суспензии и разведений
Приготовление исходной суспензии и разведений —по ГОСТ 26669.
Период времени между окончанием приготовления исходной суспензии и посевом на пита
тельную среду не должен превышать 45 мин, если не оговорено иное в соответствующем стандарте
на метод испытания конкретного вида продукта.
9.3 Метод подсчета с использованием твердой среды
9.3.1 Посев на агар в чашках Петри
Готовят среды (содержащуюся на водяной бане при 47 °С в расплавленном состоянии), чашки
Петри, жидкость для разведений и разведения, подлежащие исследованию в соответстеии с 9.2, в
объемах и количествах, предусмотренных планом посева, установленным в соответствии с конкрет
ным стандартом на метод испытания.
В маркированные чашки Петри вносят предусмотренные объемы разведений, подлежащих
исследованию. Наливают в каждую чашку объем среды в соответствии с 7.7. Незамедлительно и
тщательно перемешивают расплавленную среду и посевной материал так. чтобы микроорганизмы
равномерно распредслились в массе среды. Для охлаждения и застывания оставляют чашки Петри
на холодной горизонтальной поверхности (время затвердения агара не должно превышать 10 мин).
Если в исследуемом продукте предполагается присутствие микроорганизмов, образующих при
росте налеты на поверхности среды («ползучий* рост колоний, например Proteus spp.), то при
выполнении исследований чашки Петри с посевным материалом заливают сверху стерильным
голодным агаром или же агаром, идентичным питательной среде.
9.3.2 Поверхностный посев
Посевной материал вносят в центр маркированной чашки Петри на поверхность агаровой
питательной среды (приготовленной в соответствии с 7.7). Как можно быстрее равномерно распре
деляют его по поверхности среды с помощью стерильного стеклянного или пластикового шпателя
до тех пор. пока на поверхности агара не останется видимых следов жидкости.
Для улучшения распределения могут быть использованы стеклянные шарики. В некоторых
случаях, устаноатенных в стандартах на конкретные методы испытаний, посевной материал наносят
на мембрану и затем распределяют с помощью стеклянных шариков.
9.3.3 Термостатированне
Засеянные чашки немедленно переворачивают ибыстро помешают в термостат, установленный
на соответствующую температуру (кроме особо оговоренных случаев). Если наблюдается чрезмерное
обезвоживание среды (например при 55 ’С или вследствие интенсивной циркуляции воздуха),
чашки перед термостнрованием неплотно укладывают в пластиковый пакет или аналогичное
приспособ ление с тем же эффектом. В период термостатирования допускаются
кратковременные колебания температуры, например, во время таких обычных операций, как
загрузка или разгрузка термостата.
Примечание —В отдельных случаях, чтобы нс спутатьчастицы исследуемою продуктас колониями
микроорганизмов, полезно приготовитьдубликаты засеянных чашек, которые хранят при температуре 2°Сдля
последующего сопостаатсния при подсчете с инкубированными засеянными чашками.
15