ГОСТ Р 51446-99
Прямой метод
9.6.1.2.1 Метод прямого рассева
Г1р к м е р
Кончиком петли засевают тесными штрихами примерно третью
часть поверхности агаровой среды. Стерилизуют и охлаждают петлю.
От края засеянной поверхности продолжают другую, более разряжен
ную. серию штрихов, засевая половину свободной площади. Повторя ют
процедуру на оставшейся поверхности, делая еше более редкие
штрихи.
9.6.1.2.2 Метод с использованием жидкости для разведений
Клетки суспензируют в 1—2 см3 жидкости для разведений, рас
тирая посевной материал петлей о стенки пробирки у поверхности
жидкости, затем хорошо перемешивают.
Стерилизуют и охлаждают петли. Захватывают петлей небольшое
Рисунок 1—Пример рассева.
количество микробной суспензии и далее действуют согласно 9.6.1.2.1.
9.6.1.3 Термостатирование
Кроме особо оговоренных случаев, переворачивают засеянные чашки Петри, помешают их в
термостат и выдерживают при выбранной температуре в течение заданного времени.
9.6.1.4 Выделение
После термостагнрования выделяют с чашки Петри хорошо изолированную колонию для
последующего рассева или проведения испытания.
Заключительные испытания следует по возможности проводить на клетках, полученных с
одной изолированной колонии. Если материал с одной колонии недостаточно, из нее предваритель но
выращивают субкультуру на жидкой среде или на агаровых чашках Петри. После этого
субкультура может быть использована для проведения испытаний.
9.6.2Окрашивание по Граму (модифицированный метод Хаккера)
Это окрашивание бактериальных клеток позволяет описать морфологию бактерий и класси
фицировать их на две группы на основании способности образовывать в условиях испытания
фиолетовое окрашивание с кристаллическим фиолетовым. Это разделение является следствием
различий в структуре клеточных стенок двух групп и коррелирует с другими основными различиями
между этими группами. Имеется целый ряд способов окрашивания по Граму. однако все они
основаны на методе, приведенном ниже.
9.6.2.1 Растворы
Могут быть использованы готовые имеющиеся в продаже растворы. 13 этом случае следуют
рекомендациям изготовителя.
9.6.2.1.1 Раствор кристаллического фиолетового состоит из:
кристаллического фиолетового —2.0 г;
этанола (95 %)—20 см3;
аммония оксалата (C
2
HSN
2
O
4
)—
0,8
г;
дистиллированной воды—80 см3.
Приготовление
Растворяют кристаллический фиолетовый в этаноле а оксалата аммония —в дистиллирован
ной воде. Смешивают два раствора и оставляют смесь на 24 ч перед использованием.
9.6.2.1.2 Раствор иода состоит из:
иода— 1.0 г;
калия иодида—2,0 г;
дистиллированной воды— 100 см3.
Приготовление
Растворяют иодид калия в 10 см3дистиллированной воды и добавляют порциями иод. После
растворения доводят до 100 см3 в мерной колбе.
9.6.2.1.3 Раствор сафранина состоит из:
сафранина О—0,25 г;
этанола (95 %)— 10 см3;
дистиллированной воды— 100 см3.
Приготовление
Растворяют сафранин в этаноле, затем смешивают с дистиллированной водой.
21