ГОСТ Р 51446-99
7 Приготовление и стерилизация питательных сред и реактивов
Тщательное приготовление питательных сред—один из основных этапов микробиологичес
кого исследования, требующий особого внимания.
7.1 Дистиллированная вола
Используемая вода должна быть дистиллированной или равноценной по качеству, то есть
свободной от веществ, способных ингибировать или воздействовать на рост микроорганизмов в
период испытания. Если дистиллированную воду получают из хлорированной, перед перегонкой
необходимо нейтрализовать хлор.
Дистиллированную воду хранят в емкостях, изготовленных из инертных материалов (например
нейтрального стекла, полиэтилена и т. д.), в которых перед использованием установлено отсутствие
ингибирующих веществ.
Примечание —В ряде случаев необходимо использовать свежеприготовленную воду, свободную от
растворенного диоксида углерода.
Качество воды оценивают по удельному сопротивлению, которое должно быть не менее
300000 Ом/см.
Примечание —Из-за загрязнения мри прохождении через ионообменникдеминерализованная вода
часто имеет повышенное содержание микроорганизмов, поэтому целесообразно проверять такую воду на их
содержание. Следует проконсультироваться с изготовителем ионообменника о возможности применения
улучшенных методов, уменьшающих микробиологическое заражение воды. После стерилизации путем фильт
рования деионизированной волы, сильно контаминированной микроорганизмами, она, однако, сшс может
содержать вещества, ингибирующие рост некоторых микроорганизмов.
7.2 Приготовление питательных сред
Для приготовления питательных сред используют два способа:
- из отдельных сухих или жидких компонентов:
- из сухой готовой среды.
Емкости, содержащие отдельные сухие компоненты или сухую готовую среду, хранят втемном
сухом месте при температуре, установленной изготовителем.
По истечении установленных сроков годности исходные компоненты и готовые среды не
используют.
Если сухие компоненты и среды гигроскопичны, необходимо быстро и тщательно закрывать
емкости после взятия навесок. Не используют сухие среды, имеющие признаки слеживания или
затвердения, свидетельствующие о поглощении влаги.
7.2.1 Обводнение сухих готовых сред
Использование сухих готовых сред проводят в соответствии с требованиями нормативного
документа на конкретную готовую среду н/илн рекомендациями изготовителя.
7.2.2 Измерение pH
С помощью pH-метра (по 4.4) измеряют и корректируют pH таким образом, чтобы после
стерилизации и охлаждения до 25 *С значение pH среды отличалось от требуемого не более чем на
±0,2 pH (если не оговорены другие условия).
Корректировку обычно проводят с помощью раствора гидроокиси натрия (NaOH) концентра
ции 40 г/дм3(примерно I моль/дм3) или соляной кислоты (НС1) концентрации 36.5 г/дм31примерно
1 моль/дм3).
7.2.3 Разливка сред
Среды разливают в соответствующие емкости вручную или с помощью автоматических
аппаратов (по 4.14).
Для предупреждения выбрасывания среды при стерилизации в автоклаве используют емкость,
имеющую объем в 2—Зраза больший объема разливаемой среды.
7.3 Стерилизация
Стерилизацию питательных сред и реактивов проводят рапичнымн способами, в том числе:
- влажным паром;
- фильтрованием.
В соответствии с требованиями нормативного документа на конкретный метод испытаний
н/илн рекомендаций изготовителя некоторые среды и реактивы используют без специальной
стерилизации.
После стерилизации среды проверяют ее pH, цвет, стерильность и бактериологическую
пригодность.
II