ГОСТ I» 51446-99
7.3.1 Влажная стерилизация
Влажная стерилизация проводится в отдельном автоклаве (4.5) или в аппарате для приготов ления
и разливки сред. Обычно эту операцию проводят при температуре 121 *С (245 кПа) в течение 15
мин. Для объемов сред, превышающих 1 дм3, продолжительность стерилизации может быть
изменена. Во всех случаях следуют указаниям нормативного документа на конкретный метод
испытания или инструкциям изготовителя.
Перед стерилизацией емкости со средами должны быть снабжены полосками термочувстви
тельной бумаги (имеющейся в продаже) в количестве, достаточном для фиксирования достижения
желаемой температуры во всех частях автоклава.
7.3.2 Стерилизация фильтрованием
Стерилизацию фильтрованием проводите использованием вакуума или избыточногодавления.
При этом используют мембраны и фильтры диаметром пор 0,22 мкм. Перед применением они
должны быть простерилизованы в автоклаве (4.5). Закупленные в готовом стерильном состоянии
фильтрующие элементы или мембраны используют в соответствии с инструкциями изготовителя.
Различные детали фильтрующих устройств, в собранном или разобранном виде, стерилизуют
в автоклаве (4.5) в течение 15 мин при температуре 121 *С. В случае необходимости после автокла
вирования проводят сборку этих устройств в асептических условиях в стерильном боксе. Некоторые
устройства в собранном виде могут быть закуплены в стерильном состоянии.
7.4 Хранение
Каждая упаковка бутылей, пробирок или чашек Петри должна быть этикетирована и содержать
следующую информацию:
- название среды;
- дату приготовления и/или дату истечения срока годности.
7.4.1 Питательные среды и реактивы лабораторного изготовления
Питательные среды, разлитые в бутыли и пробирки, а также реактивы, не использованные
немедленно, предохраняют от света и высыхания (например используют при хранении резиновые
пробки или завинчивающиеся крышки).
Если не оговорено в нормативном документе на конкретный метод испытания, среды хранят
в холодильнике (4.7) не более трех месяцев или при температуре 18—23 *С не более одного месяца
в условиях, не допускающих изменения их состава.
Подсохшие среды не используют.
Перед использованием желательно температуру питательной среды довести до температуры в
помещении лаборатории.
7.4.2 Готовые питательные среды и реактивы
Готовые питательные среды и реактивы используют в соответствии с инструкциями изготови
теля. в которых должны быть указаны сроки годности, температура и условия хранения, условия
применения (pH и прочее), контроль качества.
7.5 Расплавление агаровых питательных сред
Питательные среды расплаатяют на кипящей водяной бане или другим способом, который дает
аналогичный результат (напримертекучим паром вавтоклаве или с помощью микроволновой печи).
Избегают перегрева среды и удаляют ее сразу же после расплавления. Перед использованием
питательную среду содержат в расплавленном состоянии на бане с терморегулятором (4.9) при
температуре (47 ± 2) ‘С. Питательную среду температурой выше 50 ‘С не используют. Сохраняют
расплавленную питательную среду не более 8 ч. Не использованную до конца среду после ее
затвердения не применяют.
В случае особо чувствительных питательных сред длительность нахождения в расплавленном
состоянии следует сократить в соответствии с требованиями стандарта на конкретный метод
испытания.
7.6 Деаэрирование питательных сред
При необходимости деаэрирования питательную среду нагревают непосредственно перед
использованием на кипящей водяной бане или текучим паром втечение 15мин, пробки или крышки
приоткрывают. После прогревания их плотно закрывают и быстро охлаждают среду до рабочей
температуры.
7.7 Подготовка чашек Петри
Расплавленную агаровую питательную среду наливают в чашки Петри таким образом, чтобы
толщина ее слоя была не менее 2 мм (например для чашек диаметром 90 мм обычно требуется
12 см3агаровой среды). Затем для охлаждения и затвердевания среды чашки Петри помещают на
холодную горизонтальную поверхность.
12