ГОСТ 32031—2022
ПАЛ — питательный агар для выделения листерий;
ПБЛ — питательный бульон для выделения листерий;
ПЦР — полимеразная цепная реакция;
PBS — фосфатно-солевой буфер;
TSB — трипказо-соевый бульон;
TSYEA — триптон-соевый агар с дрожжевым экстрактом;
TSYEB — триптон-соевый бульон с дрожжевым экстрактом;
UVM — селективный накопительный бульон;
VP — реакция Фогеса-Проскауэра.
5 Сущность метода
Метод выявления бактерий L. monocytogenes и других видов Listeria (Listeria spp.) в определенной
массе или объеме продукта, а также на определенной площади поверхности производственной окружа
ющей среды состоит из четырех последовательных этапов (см. 5.1, 5.2, 5.3, 5.4 и приложение А).
5.1 Первичное обогащение анализируемой пробы в жидкой среде со сниженной концентрацией
селективных компонентов при температуре 30 °С в течение 24—26 ч.
Примечание — Бактерии рода Listeria в продукте могут находиться в небольшом количестве, очень ча
сто на фоне значительного количества микроорганизмов других родов. Поэтому для выявления небольшого коли
чества бактерий рода Listeria, а также «поврежденных» клеток в пробе необходим этап селективного обогащения
на среде с пониженной концентрацией селективных компонентов.
Присутствие L. monocytogenes может быть замаскировано присутствием других видов Listeria, в частности
L. innocua или L. ivanovii.
5.2 Вторичное обогащение посевного материала, полученного по 5.1 в жидкой среде с полной
концентрацией селективных компонентов при температуре (37 ± 1) °С в течение (24 ± 2) ч при выяв
лении L. monocytogenes и 48 ч — при выявлении Listeria spp. В случае использования другой жидкой
питательной среды следует руководствоваться рекомендациями производителя.
5.3 Пересев посевного материала, полученного по 5.1 и 5.2, параллельно на две плотные селек
тивные среды:
а) первая среда: ALOA.
Примечание — Допускается использование других сред с тем же составом;
б) вторая среда (обязательная): одна из плотных селективных сред, на выбор лаборатории:
Оксфорд агар, или Палкам агар, или ПАЛ, или хромогенные среды, отличные от первой среды [см.
5.3 а)].
Посевы на средах ALOA культивируют при температуре (37 ± 1) °С и просматривают через
(24 ± 3) ч, при необходимости культивируют еще через (24 ± 3) ч, контролируя наличие роста колоний,
характерных для L. monocytogenes или других видов Listeria.
Примечание — Некоторые L. monocytogenes характеризуются медленной активностью PIPLC (фосфа-
тидилинозитолфосфолипазы
С)
и могут проявлять на нее например, через 4 дня культивирования.
Некоторые штаммы L. monocytogenes образуют очень слабую зону помутнения среды вокруг колоний в слу
чаях испытанного стресса, в частности кислотного.
Температура и продолжительность инкубации на второй селективной среде определяется согласно рекомен
дациям производителя питательных сред.
5.4 Подтверждение
Колонии с характерным для Listeria monocytogenes и других видов Listeria (Listeria spp.) ростом,
полученные по 5.3, пересевают на поверхность плотных неселективных питательных сред и культи
вируют при температуре (37 ± 1) °С в течение (24 ± 3) ч для дальнейшего подтверждения по тестам
идентификации.
6 Питательные среды, тест-системы и реактивы
6.1 Общие требования
Состав и приготовление питательных сред и реактивов — в соответствии с приложением Б.
3