ГОСТ 32031—2022
100 см3
5,0—7,0 см3
Б.5.1.4 Готовая среда
Состав:
основа среды (см. Б.5.1.1 или Б.5.1.2)..................................................
дефибринированная кровь барана........................................................
Приготовление
Воснову среды (см. Б.5.1.1 или Б.5.1.2), охлажденную на водяной бане до температуры (47 ± 2) °С, добавля
ют дефибринированную кровь барана (см. Б.5.1.3). Среда должна иметь pH (7,2 ± 0,2) ед. pH.
Готовую среду осторожно перемешивают и разливают в чашки Петри (не более 10 см3на чашку) и после за
твердения агара подсушивают его при температуре (47 ± 2) °С в течение 30 мин или в ламинарном боксе втечение 1—
2 ч или в других условиях, обеспечивающих испарение конденсационной влаги и исключающих микробное за
грязнение.
Среду в чашках хранят при температуре (4 ± 1) °С не более двух суток.
Слой агара в чашке Петри должен быть равномерно окрашен в красный цвет. Для посева должна использо
ваться подсушенная среда.
Б.6 Суспензия из эритроцитов барана для определения гемолитической активности
Приготовление
Кровь из яремной вены барана отбирают в стерильную банку с бусами и дефибринируют (см. Б.5.1.3).
Эритроциты трижды отмывают изотоническим раствором хлорида натрия путем центрифугирования при
1000—2000 об/мин в течение 5—10 мин соответственно. После последнего центрифугирования надосадоч-ная
жидкость должна быть прозрачной. Красный цвет жидкости (гемолиз) свидетельствует о непригодности
эритроцитов к применению. Отмытые эритроциты барана необходимо хранить при температуре (3 ± 2) °С не
более двух суток.
Если гемолиз эритроцитов барана не наблюдается, необходимо внести 2 см3кровяных телец в 98 см3фос
фатно-солевого буфера (PBS) (см. Б.11).
Если гемолиз эритроцитов наблюдается, необходимо внести около 4 см3слоя кровяных телец в 10 см3фос
фатно-солевого буфера (PBS) (см. Б.11) и осторожно перемешать, а затем центрифугировать. Если жидкость на
поверхности стала четко красного цвета благодаря выраженному гемолизу, не допускается использование такой
суспензии эритроцитов, она должна утилизироваться.
Суспензию эритроцитов барана необходимо хранить при температуре (3 ± 2) °С не более пяти суток.
Б.7 Среды для определения ферментативных свойств
Б.7.1 Бульон с бромкрезоловым пурпурным
Б.7.1.1 Основа среды
10,0 г
1,0 г
5,0 г
0,02 г
1000,0 см3
Состав:
протеозный пептон..................................................................................
мясной экстракт......................................................................................
хлорид натрия.........................................................................................
бромкрезоловый пурпурный..................................................................
дистиллированная вода.........................................................................
Приготовление
Компоненты или сухую готовую среду растворяют в дистиллированной воде.
Устанавливают pH среды таким образом, чтобы после стерилизации его значение составляло
(6,8 ± 0,2) ед. pH. Разливают среду в пробирки соответствующего объема и стерилизуют в автоклаве при тем
пературе 121 °С в течение 15 мин.
Б.7.1.2 Растворы углеводов
Состав:
углевод*.................................................................................................... 5,0 г
дистиллированная вода..........................................................................100 см3
Приготовление
Каждый из углеводов отдельно растворяют в 100 см3дистиллированной воды и стерилизуют раствор путем
фильтрования.
Б.7.1.3 Готовая среда
Состав:
основа среды (см. Б.7.1.1)...................................................................... 9,0 см3
* L-рамноза, D-ксилоза.
25