ГОСТ 32031—2022
Таблица 1— Подтверждающие тесты на бактерии рода Listeria
Статус тестов
Тесты для идентификации бактерий
рода
Listeria
Результаты
Обязательные
Микроскопия
Тонкие короткие грамположительные палочки
или коккобациллы
Реакция на каталазу
+
Необязательные
VP тест
+
Подвижность при 25 °С
+
9.5.2 Микроскопия
Культуры, выделенные по 9.5.1.2, окрашивают по Граму согласно ГОСТ 30425 или ГОСТ ISO 7218
и микроскопируют.
Бактерии рода Listeria spp. представляют собой грамположительные тонкие, короткие палочки
или коккоподобные палочки.
9.5.3 Реакция на каталазу
Берут изолированную колонию, выделенную по 9.5.1.2, и вносят в каплю 3 %-ного раствора
перекиси водорода (см. 6.6.1). Мгновенное образование пузырьков газа указывает на положительную
реакцию.
Бактерии Listeria spp. являются каталазоположительными.
9.5.4 Реакция Фогеса-Проскауэра (VP)
Пробирку, содержащую 3 см3 среды VP (см. Б.10.3.1) инокулируют с помощью петли культурой,
полученной по 9.5.1.2, и инкубируют при температуре 37 °С в течение (24 ± 3) ч. После инкубации до
бавляют 0,6 см3 5 %-ного раствора а-нафтола (см. Б.10.3.2) и 0,2 см3 40 %-ного раствора гидроксида
калия (см. Б.10.3.3), хорошо встряхивают, наклоняя пробирку, чтобы увеличить площадь поверхности
раздела воздух — жидкость и учитывают результат через 15 мин и 1 ч. Положительная реакция обозна
чена ярко-красным цветом раствора.
9.5.5 Определение подвижности
Культуру, выделенную по 9.5.1.2, пересевают в жидкую неселективную питательную среду
(см. 6.5.2).
Посевы культивируют при температуре (25 ± 1) °С от 8 до 24 ч до появления мутности в бульоне.
Затем каплю культуральной жидкости помещают на предметное стекло, накрывают сверху покровным
стеклом и микроскопируют.
В поле зрения микроскопа должны наблюдаться короткие палочки с опрокидывающими движе
ниями.
При культивировании посевов в жидкой питательной среде при температуре выше (25 ± 1) °С под
вижность бактерий не наблюдается.
В качестве альтернативного теста определения подвижности можно использовать посев культуры
уколом в питательную среду (см. 6.6.4).
Посевы культивируют в термостате при температуре (25 ± 1) °С в течение 48 ч.
Бактерии Listeria spp. подвижны при температуре (25 ± 1) °С, образуют характерный рост вокруг
линии укола, похожий на зонтик. Если рост слабый, необходимо культивировать еще пять суток с еже
дневным просмотром посевов.
9.6 Подтверждение Listeria monocytogenes
Для подтверждения Listeria monocytogenes культуры, выделенной по 9.5.1.2, проводят тесты, при
веденные в таблице 2.
Таблица 2 — Подтверждающие тесты на L. monocytogenes
Статус тестов
Тесты для идентификации
L. monocytogenes
Результаты
Обязательные
Микроскопия*
Тонкие короткие грамположительные палочки или кок
кобациллы
В-гемолиз
+
8