ГОСТ 32031—2022
Окончание таблицы 2
Статустестов
Тесты для идентификации
L. monocytogenes
Результаты
Обязательные
Ферментация L-рамнозы
+
Ферментация D-ксилозы
-
Необязательные
Реакция на каталазу
+
Подвижность при
25 °С
+
КАМП-тест
+
* Микроскопия необязательна для колоний, отобранных с первой и для второй плотной селективной среды,
если они позволяют различать патогенные и непатогенные виды Listeria spp.
9.6.1 Определение бета-гемолитической активности
9.6.1.1 С использованием кровяного агара
Поверхность кровяного агара (см. 6.7.1.1) перед использованием необходимо тщательно подсу
шить. Чашку с тыльной стороны целесообразно разделить на квадраты и проколоть каждый маркиро
ванный квадрат бактериальной иглой с колонией культуры, полученной по 9.5.1.2. На каждую чашку с
кровяным агаром, кроме исследуемых культур, должны быть посеяны контрольные штаммы, такие как L.
monocytogenes (положительный контроль) и L. innocua (отрицательный контроль).
Посевы культивируют при температуре (37 ± 1) °С в течение (24 ± 2) ч.
Зона (3-гемолиза на кровяном агаре у культуры L. monocytogenes — в виде узкой, чистой, светлой
зоны; L. innocua — нет зоны гемолиза вокруг укола; L. seeligeri— слабая зона гемолиза; L. ivanovii —
широкая, четко обозначенная зона гемолиза.
После инкубирования проводят визуальное сравнение прозрачности зон вокруг анализируемых и
контрольных культур.
Примечание — Зона (3-гемолиза более четко видна при удалении колонии с поверхности агара вокруг
места посева.
9.6.1.2 С использованием суспензии эритроцитов барана
В 0,15 см3жидкой неселективной питательной среды (см. 6.5.2) необходимо внести одну колонию
культуры, полученную по 9.5.1.2.
Посевы культивируют при температуре (37 ± 1) °С в течение 24 ч. Затем добавляют 0,15 см3 су
спензии эритроцитов барана (см. 6.7.1.2) и продолжают культивирование при температуре (37 ± 1) °С от
15 до 60 мин, с последующим охлаждением при температуре (3 ± 2) °С около 2 ч.
При наличии у культуры гемолитической активности — жидкость окрашена в соломенно-коричне
вый цвет и отсутствует осадок красных кровяных клеток на дне лунки.
При отсутствии гемолитической активности наблюдается осадок красных кровяных клеток на дне
лунки. Клетки могут быть красно-коричневыми по цвету.
Если реакция неопределенная, следует оставить культуру при температуре (3 ± 2) °С на 24 ч.
9.6.2 Определение лецитиназной активности (при необходимости)
При необходимости изучения лецитиназной активности культуры, полученной по 9.5.1.2, можно
использовать лецитин-агар с активированным углем и без угля.
Поверхность лецитин-агара с активированным углем и без угля (см. 6.6.5) перед использованием
необходимо тщательно подсушить. Чашку с тыльной стороны целесообразно разделить на квадраты и
высевать на каждый маркированный квадрат бактериологической петлей колонию культуры, получен
ной по 9.5.1.2. На каждую чашку с лецитин-агаром с активированным углем и без угля, кроме исследу
емых культур, должен быть посеян контрольный штамм L. monocytogenes (положительный контроль).
Посевы культивируют при температуре (37 ± 1) °С в течение (48 ± 2) ч.
L. monocytogenes при росте дает плотную зону помутнения шириной 3,0—6,0 мм на лецитин-агаре
с активированным углем за счет гидролиза лецитина.
L. monocytogenes при росте не дает плотную зону помутнения на лецитин-агаре без активирован
ного угля.
9