ГОСТ 31209—2003
леиный раствор тщательно перемешивают, при этом концентрация антигена в нем составляет 50 минималь
ных пирогенных доз в 1 мл. Берут 0.1 мл этого раствора и переливают в пробирку с 0.9 мл апирогенного
раствора хлорида натрия. После этого концентрация антигена будет составлять 5 минимальных пирогенных
доз в 1 мл.
5.4.7.2.3 Приготовление раствора комплемента
Берут длинным анатомическим пинцетом гранулу замороженного комплемента и помещают в
пробирку.
5.47.2.4 Приготовление опытного образца
В пробиркус притертой пробкой наливают 1мл испытуемогообразца вытяжки, антитела и комплемент
согласно паспорту. Содержимое пробирки перемешивают встряхиванием.
5.47.2.5 Приготовление контрольногообразца с отрицательной реакцией
В пробирку с притертой пробкой наливают 1 мл раствора хлорида натрия, антитела и комплемент
согласно паспорту. Содержимое пробирки перемешивают встряхиванием.
5.47.2.6 Приготовление контрольного образца с положительной реакцией
В пробиркус притертой пробкой наливают 0.1 мл раствора антигена по 5.47.2.2 идобавляютантитела
и комплемент согласно паспорту. Содержимое пробирки перемешивают встряхиванием.
5.47.27 Опытный и контрольные образцы помещают в термостат. Проводят инкубацию в течение
18 — 24 ч при температуре (27
±
2)°С
втермостате или при температуре (5
±
2) °С вхолодильнике. Рекомен
дуемый температурный режим — в соответствии с указанным в паспорте.
5.47.2.8 Приготовление биосеисориой системы
В пробирки отмеряют пипеткой объем разбавителя, указанный впаспорте, ставят их в водяную баню
при температуре (401,5) °С. В каадую пробирку добавляют объем антител, указанный в паспорте, тща
тельно перемешивают встряхиванием. Длинным анатомическим пинцетом, охлажденным до температуры
жидкого азота, извлекают из сосуда Дьюара гранулу спермы и быстро опускают в нагретый раствор.
После оттаивания гранулы содержимое пробирки перемешивают и выдерживают 15 мин. НЕ
ДОПУСКАЕТСЯ ОТ ТАИВАТЬ НЕСКО
Л
ЬКО ГРАНУ
Л
В ОДНОЙ ПРОБИРКЕ! Содержимое пробирок
сливают в одну и переме шивают встряхиванием. Получается маточный раствор спермы.
5.47.2.9 Приготовление рабочих образцов
В каждую пробирку контрольной и опытной серий добавляют по 0.2 мл маточного раствора спермы.
5.4.7.2.10 Подготовка пробы к исследованию на стенде
Каждый рабочий образец переносят в кювету. Затем кювету устанавливают в кюветодержатель
стенда.
5.4.7.2.11 Проведение накопления экспериментальныхданных
Нажатием кнопки «ПУСК» включают процесс накопления. Придостижении нулевых значений показа
теля подвижности во всех кюветах или по желанию оператора проводят остановку процесса накопления
данных отжатием кнопки «ПУСК».
5.4.7.2.12 Обработка экспериментальныхданных
Для каждогообразца выживаемость S рассчитывают по формуле
О
S - 1 т ,,
1-1
где
т,
— /-е значение показателя подвижности;
i
— текущий номер оценки показателя подвижности;
п
— количество оценок показателя подвижности.
5.4.7.2.13 Оценка результатов контроля
Если для контрольных образцов с положительной и отрицательной реакциями выполнено
5.4.7.2.13.1
соотношение
S4" -
SK°.
где ЗГ’н и SKO — среднее арифметическое выживаемости выборокобразцов положительного и отри
цательного контроля, тооценивают результаты испытаний образцов по 5.4.7.2.13.2. В любом другом случае
испытания повторяют, начиная с 5.47.2. Если при повторных испытаниях результат будет таким же, испы
тания повторяют с новым набором реактивов и посуды.
18