ГОСТ 31209-2003
крови (эритроцитной массы) 72ч при температуре от 4 СС до 6 °С. 5 мл крови (эритроцитмой массы) центри
фугируют 10 мин при 2000 об/мин. Надосадочную жидкость сливают, к осадку добавляют 8 мл стериль
ного 0,9%-ного раствора хлористого натрия. Содержимое взбалтывают и центрифугируют 10 мин при
2000 об/мин. Надосадочную жидкость сливают. Эту операцию (отмывание клеток) повторяют два раза.
После отмывания надосадочная жидкость должна быть прозрачна, бесцветна и не иметь следов
гемолиза.
Если надосадочная жидкость неотвечает указанным требованиям, эритроциты не могут быть исполь
зованы для приготовления взвеси.
Для получения 10%-ной взвеси эритроцитов 1 мл осадка клеток смешивают с 9 мл 0,9%-ного раство
ра хлористого натрия. Полученную взвесь эритроцитов допускается хранить не более 24 ч при темпера
туре от 4 °С до 6 °С в холодильнике.
5.4.4.4 Приготовление проб (контрольной и с 100%-ным гемолизом)
5.4.4.4.1а) Контрольная проба— 0.5 мл 10%-ной взвеси эритроцитов и 5 мл 0.9%-ного раствора хло
ристого натрия — для контейнеров «Комполласт».
б) Контрольная проба — 0.5 мл 10%-ной взвеси эритроцитов и 5 мл раствора «Глюгицир» (в стекле),
используемого в качестве контрольного образца данной испытуемой партии, — для контейнеров
«Гамаком».
5.4.4.4.2Проба с 100%-ным гемолизом: 0.5 мл 10%-ной взвеси эритроцитов и 5 мл дистиллированной
воды — происходит полное разрушение эритроцитов, что соответствует 100%-ному гемолизу.
Контрольную пробу и пробу с 100%-ным гемолизом готовят для каждого образца эритроцитной
взвеси.
5.4.4.5 Проведение определения
В три пробирки помещают по 0,5 мл 10%-ной взвеси эритроцитов. К0,5 мл 10%-ной взвеси эритроци
тов в каждую пробирку прибавляют по 5 мл вытяжки, в которую предварительно добавлен хлористый нат
рий. Смесь ставят в термостат на 1ч при температуре (37
±
2) вС, затем центрифугируют втечение 20 мин
при 2000 об/мин.
Все манипуляции по отношению к контрольной пробе и пробе с 100%-ным гемолизом проводят парал
лельно с опытными пробами, как описано выше. Надосадочную жидкость отделяют для проведения изме
рений оптической плотности.
5.4.4.6 Оптические измерения
Оптическую плотность опытной, контрольной пробы и пробы с 100%-ным гемолизом измеряют на
фотоэлектроколориметре при длине волны 540 нм против «холостой» пробы (вода). Толщина кюветы 1см.
Результаты регистрируют по оптической плотности.
5.4.4.7 Расчет процента гемолиза проводят по формуле
Процент гемолиза = gfl£
1О
^ х 100
х К
.
Ь 0
где
Еос
— оптическая плотность опытной пробы:
Е
к
— оптическая плотность контрольной пробы:
Е100 — оптическая плотность воды со взвесью эритроцитов — 100%-ный гемолиз;
К
— поправочный коэффициент, учитывающий дополнительное разбавление дистиллированной
водой при условии, что Е1(Х, > 1.0.
П р и м е ч а н и е — Если оптическая плотность контрольной пробы (10%-ная эритроцитная взвесь с
0,9%-ным раствором хлористого натрия) составляет 0.03 и более, результаты всего опыта недостоверны и не
учитываются.
Оптическая плотность раствора с 100%-ным гемолизом должна быть не менее 0.8 и не более 1,0.
В случае отклонения от указанного предела опыт следует повторить с вновь приготовленной эритро
цитной взвесью.
5.4.4.8 Оценка результатов
Испытуемое изделие свободно от гемолитически действующих веществ, если процент гемолиза во
всех трех пробах менее двух.
Если процент гемолиза одной пробы более 2. опыт следует повторить. При получении такого же ре
зультата вытяжкусчитают гемолитически активной, и дальнейшие испытания не проводят.
токсикологические испы
В случае отсутствия гемолитического действия проводят дальнейшие
тания.
13