ГОСТ Р 52815— 2007
8.1.5Для подтверждения принадлежности типичных и атипичных колоний ккоагулазоположительным
стафилококкам отбирают не менее пяти типичных и/или атипичных колоний.
Для подтверждения принадлежности отобранных типичных и атипичных колоний к коагулазополо-
жительным стафилококкам пересевают каждую отобранную колонию отдельно вжидкую среду, приготов
ленную по 5.2, и на поверхность одной из скошенных питательных сред — мясопептонного агара, приготов
ленного по 5.8. или среды, приготовленной из сухого ГРМ-arapa по 5.10.
Посевы инкубируют при температуре (37 ± 1 )°С в течение (24 ± 3) ч.
8.2 Метод НВЧ — определение количества коагулазоположительных стафилококков
8.2.1 Каждую навеску исследуемого продукта и (или) его разведение в трехкратной повторности вы
севают в пробирки с одной из сред, приготовленных по 5.5 или 5.9.
8.2.2 При определении количества коагулазоположительных стафилококков по методу НВЧ высевают
не менее трех последовательных навесок исследуемого продукта и (или) его разведения, отличающиеся
по количеству продукта в них в 10 раз.
В каждую из трех пробирок со средой двойной концентрации вносят по 10 см3пробы жидкого продук
та или по 10 см3первого разведения (т.е. 1 г пробы) продукта другой консистенции.
В каждую из трех пробирок со средой нормальной концентрации вносят по 1 см3 пробы жидкого
продукта или 1 см3первого разведения (т.е. 0.1 г пробы) других продуктов.
Для каждого последующего разведения (т.е. 10"’. 10’2, 10 3— для жидких продуктов или 10"2. Ю"3
или 10"4для продуктов другой консистенции), процедуру повторяют, как указано выше, используя свежую
стерильную пипеткудля каждого разведения.
Готовят такое число разведений, чтобы а конечном разведении получить три отрицательных
результата.
Осторожно перемешивают инокулят со средой, избегая внесения воздуха.
Подготовка Жиолитти-Кантони бульона кпосеву, создание анаэробных условий для роста микроорга
низмов — по 8.1.1.
8.2.3 Инкубирование пробирок с посевами, пересев выросших культур на селективно-диагностичес
кие среды, отбортипичных и атипичных колоний, их пересевдля подтверждения присутствия коагулазопо
ложительныхстафилококков проводят по 8.1.2— 8.1.5.
8.3 Метод определения количества коагулазоположительных стафилококков посевом на
агаризованную среду
8.3.1 Из навески продукта готовят исходное и ряд десятикратных разведений по ГОСТ 26669
таких, чтобыможнобылоопределить в 1 г (см3) продуктапредполагаемоеколичествокоагулазополо
жительных стафилококков или их допускаемое количество, указанное в документе на исследуемый
продукт.
Переносят с помощью стерильной пипетки 0.1—0,2 см3 продукта, если продукт жидкий, или
0,1 — 0.2 см3исходной суспензии в случае продуктовдругой консистенции, на поверхность одной из сред,
указанных в 8.1.3.
Байрд-Паркер агар с кроличьей плазмой и бычьим фибриногеном используют для посева сильно
обсемененных продуктов, например, приготовленных из сырого мяса.
Для посева продукта или каждого его разведения используют две параллельные чашки Петри со
средой. Подготовку чашек Петри со средой к посеву и посев проводят
по ГОСТ 26670
и 5.1.6.
Если необходимо, повторяют процедуру для исходного разведения, если продукт жидкий, или для
десятикратного разведения других продуктов, а также для последующих десятикратных разведений.
Для посевав качестве арбитражной среды используютБайрд-Паркерагар.
8.3.2 Если для некоторых продуктов необходимо определить небольшое количество коагулазополо
жительных стафилококков, то пределы обнаружения метода можно повысить в 10раз за счет посева 1см3
продукта, если продукт жидкий, или 1 см3исходной суспензии в случае других продуктов. По 1 см3высе
вают на поверхность среды водной большой чашке Петри (диаметром 140 мм) либо на поверхность среды в
трех маленьких чашках Петри (диаметром 90 мм). В обоих случаях высевают параллельные навески,
используя для этого две большие чашки Петри или шесть маленьких.
8.3.3 С помощью стерильного шпателя осторожно и быстро распределяют посевной материал по
поверхности агаризованной среды вчашке Петри, стараясь не касаться стенок чашки. Примерно в течение
15 мин дают подсохнуть поверхности среды под крышками
по ГОСТ26670.
8.3.4 Чашки Петри с посевами переворачивают крышками вниз и инкубируют в термостате при темпе
ратуре (37 ± 1) °С в течение 24 — 48 ч.
12
168