ГОСТ 10444.1-84 С. 12
(вместо поджелудочной железы можно брать 3—5 гпанкреатина) и 20см3 хлороформа. Бутылки плотно
закрывают пробкой и энергично встряхивают (пробку надо придерживать), ставят в термостат при
температуре 37 *С на 3—4 ч. Мясо в виде мелкозернистой массы осаждается на дно бутыли.
Жидкость над мясом должна быть прозрачной. Жидкость сливают, фильтруют и стерилизуют при
температуре (121±1) *С в течение 20 мин. Готовый раствор должен давать положительную реакцию
на триптофан (розовое окрашивание при прибавлении двух капель бромной воды в пробирку с
пробой).
5.20.2. Для приготовления бульона Хоттинтера смешивают 200см5основного раствора Хоттинге-
ра, 400 см’ мясного твара и 400 см3воды, добавляют 5 г хлористого натрия, 0,2 г фосфорнокислого
двузамешенного натрия или фосфорнокислогодвузшешенного калия, кипятят 10 мин и
устанавлива ют pH (7.6±0,1). Бульон Хоттинтера разливают высоким столбиком по пробиркам или
флаконам, на дно которых кладут кусочки пареного мяса или фарша, наслаивают стерильное
вазелиновое масло высотой около 2,0 см и стерилизуют при температуре (121±I) ‘С втечение 20
мин.
5.20.3. Для приготовления плотной среды Хоттинтера с триптоном, глюкозой и дрожжевым
экстрактом в 1 дм3 бульона Хоттинтера вносят 0.5 г дрожжевого экстракта или 2.5 см’ раствора
дрожжевого экстракта. 5 г глюкозы, 5 г трнптона. 15-20 г агара, устанавливают pH среды <7,1±0,1) и
стерилизуют ее при температуре (121± I) ’С втечение 20 мин. Перед употреблением в расплавленную
стерильную среду асептически вносят 0.6 г аскорбиновой кислоты.
5.20.4. Плотную среду Хоттинтера с глюкозой и дрожжевым экстрактом приготовляют по
п. 5.19.3, но без триптона и аскорбиновой кислоты.
5.20.5. Бульон Хоттзшгера и плотную среду Хогтннгера с триптоном, глюкозой и дрожжевым
экстрактом применяют для культивирования мезофильных анаэробных микроорганизмов: плотную
среду Хоттинтера с глюкозой и дрожжевым экстрактом —для культивирования мезофильных аэроб
ных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.
5.21. Бульон (агар)
У,
с печенью
2 кг говядины, очищенной от жира, сухожилий и пленок и пропущенной через мясорубку,
смешивают с 500 гфарша из печени и 9 дм3воды в эмалированной посуде. Нагревают до температуры
50 *С и прибавляют 100 см3раствора соляной кислоты концентрации 42.7 г/дм3(для приготовления
100 см3 раствора соляной кислоты концентрации 42,7 г/дм’ в мерную колбу вместимостью 100см’
наливают 50—70 см:-дистиллированной воды, затем прибаатяют 10см1концентрированной соляной
кислоты с плотностью р = 1,18 г/с.м3, раствор доливают до метки дистиллированной водой. При
использовании концентрированной соляной кислоты с другой плотностью делают пересчет на требуе
мую концентрацию 42.7 г/дм’).
Количество пепсина, прнбаатяемого к смеси мяса, печени и полы определяется его титром, но
прибаатяют его на 50
%
батыие, чем подсчитано. Например, при титре пепсина 1:10для расщепления
2.5 кг белка требуется 0,25 г пепсина: в действительности же его прибаатяют 0,375 г.
Пепсин остаатяют действовать на смесь в течение 20 ч при температуре 50 "С в водяной бане.
После 20 ч воздействия пепсина на смесь она должна давать положительную биуретовую реакцию и
реакцию на триптофан.
Биуретовую реакцию проверяют с 5 см3 надосадочного слоя расщепленной смеси, в которую
вносят для небольшого подщелачивания 1—2 капли раствора гидроокиси натрия концентрации
2г/дм3 и прибаатяют несколько капель раствора сернокислой (окисной) меди концентрации 10
г/дм3.
11ри положительной реакции образуется фиолетовая окраска. Реакцию на триптофан устанавли-
пают с бромной водой (п. 5.20.1).
Расщепление прекращают нагреванием до температуры 85 "С. Фарш отделяют от смеси процежи
ванием через ткань. Добавлением гидроокиси натрия устанавливают pH (5,6±0,1). Смесь кипятят 5 мин.
После охлаждения фильтруют через фильтровальную бумагу. Добаатением гидроокиси натрия устанав
ливают pH (7,4±0.1). Измеряют обьем отвара и прибаатяют к нему пептон из расчета 1,5 г на 100
см3 отвара и, если нужно, агар из расчета 1,5—2 г на 100 см5отвара.
После растворения пептона и агара (при подогревании) вновь устанаативают pH (7.4±0,1).
Бульон или агар разливают в колбы и стерилизуют при температуре (127±1) ’С в течение 20 мин.
Для приготоатения бульона с печенью кусочки вареной печени массой около 1—1,5 г вносят в
пробирки и заливают бульоном до высоты 10—15 см. Стерилизуют при температуре (127±1) ’С в
течение 20мин.
223