ГОСТ Р 52723—2007
допуская образования воздушных пузырьков, так, чтобы толщина геля была не менее 5 мм. а зубцы гребе
нок были погружены в него не менее чем на 4 мм.
8.1.6 После полного застывания геля (15— 20 мин) из геля осторожно извлекают гребенки так, чтобы
не повредить образовавшиеся карманы. Кюветус готовым агарозным гелем переносят в электрофорезмую
камеру прибора.
8.1.7 В камерудля электрофореза заливают готовый раствор буфера для электрофореза так. чтобы
жидкость покрывала гелевую пластину слоем 2— 3 мм.
8.1.8 Отбирают 10 мкл продуктов ПЦР и осторожно вносят в карман гелевой пластины. При этом
следует соблюдать следующий порядок внесения проб: сначала — содержимое пробирки с К-, затем —
исследуемые пробы в строго фиксированной последовательности, и в последнюю очередь — содержимое
пробирки с К+. Электрофорез проводят при напряжении 100— 150 В в течение 20— 30 мин, при этом
красящий компонент ПЦР-смеси голубого цвета должен продвинуться не менее чем на 1 см от старта.
8.1.9 По окончании электрофореза гель помещают на фильтр трамсиллюминатора системы для доку
ментирования гелей и проводят учет полученных результатов в ультрафиолетовом свете сдлиной волны
312 нм. Регистрацию и документирование полученных результатов путем занесения в базуданных компь
ютера осуществляют при помощи системы для документирования гелей в соответствии с прилагаемым к
ней техническим описанием. Особенности интерпретации результатов качественного определения фраг
ментов видослецифичмой ДНК приведены в приложении Б (см. Б.1).
8.2Детекция продуктов амплификации фрагментов видоспецифичной ДНК растений и жи
вотных в режиме реального времени’1
8.2.1 В ходе проведения ПЦР с детекцией продукта в реальном времени амплификатор с помощью
программногообеспечения проводит построение кривых флуоресценции накопленных продуктов ПЦР. Дан
ные кривые выражают зависимость флуоресценции от количества проведенных циклов амплификации (ри
сунок Б.З приложения Б). При этом приборавтоматически определяетточку начала fog-фазы. выраженную в
количестве выполненных циклов. Эта точка характеризует исходное количествоДНК-матрицы в реакцион ной
смеси.
8.2.2 Качественное определение видослецифичной ДНК растений и животных проводят по наличию
или отсутствию в реакционной смеси определенного фрагмента (продукта ПЦР). точнохарактеризующего
тот или иной вид растения или животного. Выявлениеданного продукта происходит за счет встраивания
в него интернирующего красителя SYBR Green.
8.2.3 Результаты качественного анализа отображаются с помощью программного обеспечения прибо
ра в виде табличныхданных. Особенности интерпретации результатов качественного определения фраг
ментов видослецифичной ДНК приведены в приложении Б (см. Б.2).
9 Требования безопасности
9.1 При выполнении всех работ необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе
с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.007.
9.2 Помещение должно быть оборудовано общей приточно-вытяжной вентиляцией по ГОСТ 12.4.021.
Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать норм, установленных
ГОСТ 12.1.005.
9.3 При работе с электроустановками требования кбезопасности должны соответствовать ГОСТ 12.1.19.
9.4 Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности по
ГОСТ 12.4.004 и быть оснащено средствами пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.
10 Требования к персоналу
10.1 Проведение исследований осуществляют специалисты собразованием не ниже среднего специ
ального (лаборант, медицинская сестра, фармацевт и т.п.)под руководством лиц, имеющих высшее обра
зование.
10.2 Персонал допускается к работе после прохождения специальной подготовки и инструктажа по
соблюдению техники безопасности.
’) Детекцию данным методом проводят в случав анализа по 7.3. 7.4.
12
230