ГОСТ Р 52723—2007
Т а б л и ц а 3 — Программа амплификации (качественного определения) фрагментов видоспецифичной расти
тельной ДНК (сои. кукурузы, картофеля) в режиме реального времени
Режим амплификации
Этап программыПроцессЧисло циклов
Температура.
’С
Время,
с
194180Денатурация ДНК1
9430Денатурация ДНК
27030Отжиг праймеров40
7230*Синтез ДНК
* Включение оптики для детекции ПЦР продуктов (в реальном времени): канал для красителей FAM и
SYBR Green (оптимальная длина волны источника света — 494 нм. оптимальная длина волны для детекции
флуоресценции красителя — 518 нм).
П р и м е ч а н и е — Использование амплификаторов различных моделей может потребовать измене
ния температуры отжига праймеров на 1 “С — 2 *С.
Т а б л и ц а 4 — Программа амплификации (качественного определения) фрагментов видоспецифичной ДНК
животных (крупного рогатого скота, свиньи, курицы) в режиме реального времени
Режим амплификации
Этап программыПроцессЧисло циклов
Температура "С
Время, с
194
180
Денатурация ДНК
1
2
94
30
Денатурация ДНК
62—для крупного
рогатого скота,
65—для свиньи.
66 — для курицы
30Отжиг праймеров
40
72
30*Синтез ДНК
* Включение оптики для детекции ПЦР продуктов (в реальном времени): канал для красителей РАМ и
SYBR Green (оптимальная длина волны источника света — 494 нм. оптимальная длина волны для детекции
флуоресценции красителя — 518 нм).
П р и м е ч а н и е — Использование амплификаторов различных моделей может потребовать измене
ния температуры отжига праймеров на 1 “С — 2 *С.
7.3.6Проводятдетекцию продуктов ПЦР в соответствии с описанием к используемой модели ампли-
фикатора (для проведения ПЦР сдетекцией в режиме реального времени).
7.4Качественное определение фрагментов видоспецифичной ДНК животных с использо
ванием наборов реагентов для проведения ПЦР с детекцией в режиме реальном времени
7.4.1 В штативе размещают и маркируют необходимое количество микропробирок с лиофильно высу
шенной амплификационной смесью (для ПЦР в реальном времени) по количеству анализируемых проб, а
также микропробирки для К- и К+.В случае исследования многокомпонентных продуктов число микропро
бирок на одну пробу, а также число микропробирок для К- и К+ рассчитывается исходя из того, какое
количество видовДНК планируется идентифицировать.
7.4.2 В каждую микропробирку с ПЦР-смесью (для ПЦР в реальном времени) при помощи автомати
ческогодозатора последовательно вносят 10 мкл ПЦР-растворителя. 5 мкл стерильной дистиллированной
воды. 5 мкл смеси праймеров и зонда для выявления конкретного фрагмента видоспецифичной ДНК того
или иного компонента животного происхождения. Перед использованием смесь праймеров разморажива ют
в твердотельном термостатес охлаждением при температуре4 °С. перемешивают на микроцентрифуге-
встряхивателе 5— 10с. а затем собирают осаждением надно микропробирки путем центрифугирования на
микроцентрифуге-встряхивателе 3— 5 с. Последующую работу с праймерами проводят при температуре от
2 еС до 4 °С с использованием твердотельного термостата с охлаждением.
Ю
228