ГОСТ Р 52723—2007
7.1.2 В каждую микропробирку с ПЦР-смесью при помощи автоматического дозатора последова
тельно вносят 10 мкл ПЦР-растворителя и 5 мкл смеси праймеров для выявления конкретного фрагмента
видоспецифичной ДНК того или иного компонента растительного или животного происхождения. Перед
использованием смесь праймеров необходимо разморозить в твердотельном термостате с охлаждением
при температуре 4
СС,
перемешать на микроцентрифуге-встряхивателе 5— 10с, а затем собрать осаждени ем
надно микропробирки путем центрифугирования на микроцентрифуге-встряхивателе 3— 5 с. Последую щую
работу с праймерами рекомендуется проводить при температуре от 2 еС до 4 5С с использованием
твердотельного термостата с охлаждением.
7.1.3 В микропробирку с ПЦР-смесью для отрицательного контрольного образца вносят 5 мкл
ТЕ-буфера, подготовленного по 6.2.12. Затем в микропробирки с ПЦР-смесью добавляют по 5 мкл экстрак
та ДНК каждого из исследуемых образцов, подготовленных по разделу 6. В последнюю очередь в микро
пробирку с ПЦР-смесью для положительного контрольного образца вносят 5 мкл К+ из используемого
набора реагентов для проведения ПЦР.
7.1.4 Содержимое микропробирок растворяют путем легкого перемешивания на микроцентрифуге-
встряхивателе. После этого собираютосаждением капли ПЦР-смеси со стенок микропробирок путем цент
рифугирования на микроцентрифуге-встряхивателе в течение 3— 5 с.
7.1.5 Еслидля проведения амплификации используется амплификатор без нагреваемой крышки, то в
каждую микропробиркудобавляют по 20— 25 мкл (2 капли) минерального масла.
7.1.6 Плотно закрытые микропробирки центрифугируют 5— 7 с на микроцентрифуге-встряхивателе
при 2000 об/мин и помещают в амплификатордля проведения амплификации по программам, указанным в
таблицах 1 и 2. По окончании действия программы пробирки извлекают из амплификатора и в штативе
передают на этапдетекции продуктов ПЦР.
Т а б л и ц а 1 — Программа амплификации фрагментов вияоспецифичной растительной ДНК (сои. кукурузы,
картофеля)
Режим амплификации
Этап программыПроцессЧисло циклов
Температура. *С
Время, с
194
180
Денатурация ДНК1
94
45
Денатурация ДНК
270
30
Отжиг праймеров35
72
40
Синтез ДНК
372
240
Синтез ДНК1
П р и м е ч а н и е — Использование амплификаторов различных моделей может потребовать измене
ния времени каждого шага и/или изменения температуры отжига праймеров на 1 “С — 2 *С.
Т а б л и ц а 2 — Программа амплификации фрагментов видоспецифичной ДНК животных (крупного рогатого
скота, свиньи, курицы)
Этап программы
Режим амплификации
ПроцессЧисло циклов
Температура. ’СВремя, с
1
94
180Денатурация ДНК1
2
94
30Денатурация ДНК
62
—для крупного
рогатого скота
65—для свиньи,
66 — для курицы
30Отжиг праймеров
35
72
30Синтез ДНК
3
72
180Синтез ДНК
1
П р и м е ч а н и е — Использование амплификаторов различных моделей может потребовать измене
ния времени каждого шага и/ипи изменения температуры отжига праймеров на 1 *С — 2 "С.
8
226