ГОСТ Р 51758-2001
1
б) в пробирке с жидкой питательной средой выращивают культуру тест-штамма (напри
мер E.coli) и определяют в ней количество микробных клеток бактериологическим методом
по 4.1.1.
Далее из исходной культуры делают разведения, как это указано в таблице 1, используя вместо
изотонического раствора питательную среду. Количество клеток в 1 см’ каждой разведенной сус
пензии рассчитывают с учетом показателя разведения (отношения взятого объема концентрирован
ной суспензии к общему объему разведенной суспензии).
Измеряют оптические плотности концентрированной и разведенных суспензий на фотоэлект
роколориметре при длине волны 630 —670 нм (красный светофильтр) или 520 —560 нм (зеленый
светофильтр) в кювете с рабочей длиной 5 мм. В качестве оптического контроля используют
изотонический раствор или питательную среду.
Строят градуировочный график: по оси абсцисс откладывают количества микробных клеток в
1
см
3
суспензий, по оси ординат —соответствующие им оптические плотности.
4.1.2.3 Проведение испытания
4.1.2.3.1 Испытание жидкой питательной среды
В две-три пробирки с испытуемой питательной средой вносят культуру тест-штамма, подго
товленную по 4.1.2.2.2: по 0.2 см
5
культуры аэробного тест-штамма по 0,5 —1см
3
под слой вазели
нового масла —анаэробного. Пробы инкубируют 20 —24 ч при (37.0 ± 0,5) "С.
Пробирки с 20 —24-часовыми культурами встряхивают, пробы заливают в кюветы фотоэлект
роколориметра и измеряют оптические плотности суспензий относительно испытуемой среды в
качестве оптического контроля при длине волны 630 —670 или 520 —560 нм.
4.1.2.3.2 Испытание плотной питательной среды
В две-три чашки Петри с испытуемой плотной средой вносят по 0.5 см
3
20 —24-часовой
культуры тест-штамма по 4.1.2.2.2 и равномерно распределяют по поверхности. Чашки закрывают
и выдерживают втермостате при (37,0 ± 0.5) *Свтечение 24 ч. Затем делают смыв культуры с плотной
питательной среды в чашке 10см
3
изотонического раствора хлористого натрия. Для снятия культуры
можно использовать стеклянный шпатель или палочку с резиновым наконечником, которые затем
тщательно обмывают раствором хлористого натрия из того же объема.
Интенсивность роста микроорганизмов определяют в смыве (при слабом росте) или в десяти
кратном разведении смыва (при сильном росте), для приготовления которого 0,5 см
3
смыва вносят
в пробирку с 4,5 см’раствора хлористого натрия и тщательно перемешивают. Оптическую плотность
суспензий измеряют на фотоэлектроколори.метре при длинах ваш 630 —670 нм относительно
раствора хлористого натрия в качестве оптического контроля.
4.1.2.4 Обработка результатов
Интенсивность роста микроорганизмов выражают как среднее арифметическое результатов
двух-трех определений оптических плотностей суспензий (культуры или смыва) или как соот
ветствующее ему количество клеток в см} культуры, определенное по градуировочному
графику.
4.2Метод определения чувствительности питательной среды к разным видам микроорганизмов
Метод заключается в получении концентрированной микробной суспензии, содержащей
определенное количество микробных клеток, приготовлении из нее серии разведенных суспен
зий, высеве в испытуемую среду точных объемов разведенных суспензий и определении макси
мального разведения или минимального количества клеток, обеспечивающего рост микробной
культуры.
4.2.1 Аппаратура, материалы и реактивы
Аппаратура, материалы и реактивы по 4.1.1.1.
Тест-штамм аэробных микроорганизмов Streptococcus haemolvticus Dick 1 или другие виды
микроорганизмов, показательные для испытуемой среды.
4.2.2 Подготовка к испытанию
4.2.2.1 Подготовка испытуемой среды и бактериальной культуры
Испытуемую среду готовят по 4.1.2.2.1. бактериальную культуру —по 4.1.2.2.2.
4.2.2.2 Приготовление суспензии тест-штамма
Готовят исходную суспензию бактериальной культуры, содержащую
104
клеток в
1
см3, срав
нивая ее мутность с мутностью оптического стандарта (4.1.2.2.3).
Из полученной суспензии методом последовательных десятикратных разведений по 4.1.1.3
получают пять —семь разведенных суспензий, в которых количество клеток уменьшается пропор
ционально показателю разведения. Расчетное количество клеток в разных объемах разведенных
суспензий приведено в таблице
2
.
6