ГОСТ I*51758-2001
детального анализа —от шести до десяти разведений (показатели разведения: 2, 4,
8
. 16, 32, 64, 128,
256. 612 и 1224).
Г1о 0,5 см
1
из каждого разведения вводят двум —шести белым мышам в вену хвоста или
внутрибрюшинно. Проводят наблюдения за мышами от 1 ч до 4 сут и определяют максимальное
разведение, которое вызывает
100
%-ную гибель мышей.
5.1.4 Обработка результатов
Вычисляют силу токсина, DLM/см3, умножая показатель максимального разведения на ко
эффициент
2
.
5.2Метод определения силы токсина по индексу ингибирования микробной тест-культуры
Сущность метода заключается в культивировании в испытуемой среде тест-штамма токсино
образующего микроорганизма, стерилизующей фильтрации культуры, приготовлении разведений
фильтрата токсина питательной средой (МПБ)), инкубировании чувствительного тест-штамма мик
роорганизма (E.coli) в фильтрате токсина, его разведениях средой (МПБ) и в контрольных средах,
определении оптических плотностей культур E.coli и вычислении степени ингибирования роста
E.coli и силы токсина.
5.2.1 Аппаратура и материалы
Аппаратура и материалы по 5.1.1.
Фотоэлектроколориметр для измерения при длинах волн 630 —670 нм. погрешностью изме
рений коэффициента пропускания
±1
%.
Кюветы фотометрические из оптического стекла или пластмассы толщиной поглошаюшего
слоя 5 мм.
5.2.2 Подготовка к испытанию
Тест-штамм C.perfringens реактивируют по 4.1.2.2.2.
Тест-штамм E.coli реактивируют в МПБ по 4.1.1.2.3.
5.2.3 Проведение испытания
5.2.3.1 В две-три пробирки с 10 см
3
испытуемой среды вносят под слой вазелинового масла
по 1см
3
20 —24-часовой культуры C.perfringens по 5.2.2. Инкубируют от 5 до
6
ч при температуре
(37,0 ± 0.5) ‘С. после чего выросшую культуру (без вазелинового масла) фильтруют через стери
лизующие или мембранные фильтры. Фильтраты объединяют.
Вносят фильтрат (токсин) в МПБ по ГОСТ 20730 в разных соотношениях объемов фильтрата
и МПБ, например. 3:1; 1:1; 1:3.
5.2.3.2 В восемь стерильных пробирок вносят по 5 —
8
см
3
проб неразведенпого токсина и трех
его разведений в МПБ. по две пробирки на каждую пробу, в которых объемные доли токсина
составляют 100, 75. 50 и 25 % соответственно.
Вдругие двенадцать пробирок вносят по 5 —
8
см
3
испытуемой среды (контроль для перазве-
денного токсина) и трех ее разведений мясопепгонпым бульоном (контрольные среды для разведен
ного токсина) —по три пробирки на каждую среду.
Ввосемь пробирокс токсином и восемь пробирок с контрольными средами высевают по0.2 см>
20 —24-часовой культуры E.coli и инкубируют при 37 *С от 15до 17 ч. ’Затем определяют оптические
плотности всех инкубированных культур при длине волны от 630 до 670 нм относительно незасеян
ной контрольной среды (для каждой среды свой оптический контроль).
5.2.3.3 Рассчитывают средние арифметические результатов двух параллельных определений
оптических плотностей для каждой пробы.
5.2.4 Обработка результатов
5.2.4.1Вычисляют степени ингибирования роста E.coli неразведенным токсином и его разве
дениями /„, %. по формуле
,
- £ X
100
(
2
)
где А„— среднее арифметическое оптических плотностей культуры E.coli в фильтрате токсина или в
его разведениях;
Ак —среднее арифметическое оптических плотностей культуры E.coli в соответствующей кон
трольной среде;
100
—коэффициент пересчета в проценты.
5.2.4.2Строят график зависимости степени ингибирования от объемной доли токсина в среде
культивирования, который имеет линейный характер. По оси абсцисс откладывают объемные доли
токсина в среде E.coli в процентах: 100 %(исходный фильтрат), 75; 50 и 25 % (разведения фильтрата).
12