ГОСТ Р 51758-2001
-
)
Испытание пептона
Готовят МП Б так же. как при испытании мясной волы. При этом к 100 см
5
мясной воды по
ГОСТ 20729 добавляют вместо пептона по ГОСТ 13805 1г испытуемого пептона.
УстанавливаютpH среды, фильтруют, разливают в пробирки и стерилизуют, как при испытании
гидролизатов.
4.1.1.2.2 Подготовка чашек Петри с МПА
МПА по ГОСТ 29112 расплавляют в кипящей водяной бане, охлаждают до температуры от 55
до 45 *С,асептически разливают встерильные чашки Петри толщиной слоя около половины высоты
чашки и оставляют при комнатной температуре до застывания.
4.1.1.2.3 Хранение и реактивация культур тест-штаммов микроорганизмов
Культуры тест-штаммов микроорганизмов хранят влиофилизированном состоянии в ампулах
или пробирках с питательными средами. Пробирки закрывают резиновыми или ватно-марлевыми
пробками. Ватно-марлевые пробки парафинируют. Лиофилизированные культуры в ампулах хранят
при температуре ниже 5 ’С, в пробирках —при температуре от 4 до
6
“С.
Перед употреблением культуры реактивируют: из ампул и пробирок дважды пересевают в МПБ
и культивируют втермостате при (37 ± I) *С втечение 20 —24 ч. Для последующей работы возможны
еще два пересева в жидкие питательные среды.
4.1.1.3 Проведение испытания
В пробирку с испытуемой питательной средой, приготовленной по 4.1.1.2.1, вносят 0,2 см
3
20
—24-часовой бактериальной культуры, подготовленной по 4.1.1.2.3.
Пробу инкубируют 20 —24 ч при (37.0± 0,5) ‘С, после чего из полученной исходной культуры
делают серию десятикратных разведений:
вряд пробирок (от 5до 7) налипают по 4,5 см
3
стерильного изотонического раствора хлористого
натрия;
в первую пробирку с раствором хторнстого натрия пипеткой вносят 0,5 см
3
культуры и тща
тельно перемешивают —разведение в
10
раз. показатель разведения —
10
1;
во вторую пробирку из первого разведения чистой пипеткой переносят 0.5 см
3
суспензии и
перемешивают —разведение в
100
раз, показатель разведения —
10
;
аналогично делают последующие разведения суспензий.
Из двух разведенных суспензий показателями разведения И
3
и I0
6
или 10* и 10
7
(в зависимое™
от интенсивности роста микроорганизмов), начиная с последней, отбирают из каждой по
0.1
см
3
в пять
чашек Петри с МПА, подготовленных по 4.1.1.2.2, и равномерно распределяют по поверхности среды.
Дают жидкости впитаться, после чего чашки переворачивают вверх дном и ставят в термостат
температурой (37,0±0,5) "С на 20 —24 ч. Затем подсчитывают количество выросших колоний во всех
чашках.
4.1.1.4 Обработка результатов
Вычисляют количество КОЕ в 1см* исходной культуры Xlf клетки/см3, по формуле
V
’£ > д >
...
-
где
1
I
я
—суммарное количество колоний в // чашках, КОЕ;
i-i
N, — количество колоний в /-й чашке, КОЕ;
R, —показатель разведения для /-Й чашки (от 10
5
до 10т);
п— количество чашек, в которых производили подсчет количества колоний, игг.;
Vj —обьем разведенных суспензий, вносимых в каждую /-ю чашку, см3.
4.1.2 Турбидиметрический метод
Сущность метода заключается в выращивании тест-штаммов микроорганизмов в жидкой или
на плотной питательной среде и фотометрическом измерении оптической плотности культуральной
суспензии: жидкой культуры или смыва культуры с плотной среды.
4.1.2.1 Аппаратура, материалы и реактивы
Аппаратура, материалы и реактивы по 4.1.1.1.
Фотоэлектроколориметр для определения при длинах волн 520 —560 или 630 —670 нм. по
грешностью измерений коэффициента пропускания
±1
%.
4