ГОСТ Р 51758-2001
1
Кюветы фотометрические из оптического стекла или пластмассы толщиной поглощающего
слоя 5 мм.
Оптический стандарт мутности ОСО 42-28—29—86. эквивалентный 10 международным еди
ницам.
Агар микробиологический по ГОСТ 17206.
Среда Китт-Тароцци.
Масло вазелиновое по ГОСТ 3164.
Культура тест-штамма анаэробных микроорганизмов Clostridium oedematic os 198 (C.oedeinatiens).
Допускается применять другие средства измерения с метрологическими характеристиками и
оборудование с техническими характеристиками не хуже, а также реактивы и среды по качеству не
ниже указанных.
4.1.2.2Подготовка к испытанию
4.1.2.2.1 Приготовление питательных сред
Жидкие питательные среды готовят по 4.1.1.2.1.
Жидкую питательную среду для анаэробной культуры разливают в пробирки по 10см5, на столб
жидкости сверху наслаивают 1см
1
вазелинового масла и стерилизуют по 4.1.1.2.1. Перед использо
ванием среду регенерируют: пробирки со средой выдерживают в кипящей водяной бане от
10
до
20 мин и остужают до температуры не выше 37 ’С.
Плотные питательные среды готовят из жидких сред, для чего к 100 см
5
жидкой среды по
4.1.1.2.1 добавляют порошкообразный или мелко нарезанный агар от 1до 2.5 г (в зависимости от
его качества) и кипятят среду до полного растворения агара. Если требуется, приготовленную среду
фильтруют в горячем состоянии через ватно-марлевый фильтр, далее разливают в пробирки и
стерилизуют по 4.1.1.2.1.
Для работы с плотной питательной средой ее разливают в чашки Петри по методу 4.1.1.2.2 или
используют непосредственно в пробирках. В последнем случае производят «скашивание* питатель
ной среды. С этой целью пробирки со средой кипятят в водяной бане до полного расплавления
агара, после чего пробирки укладывают на наклонную плоскость с углом наклона примерно К) —
20
’ и выдерживают до застывания среды.
4.1.2.2.2 Реактивация микробных культур
Перед употреблением культуры реактивируют.
Реактивация аэробных культур —по 4.1.1.2.3.
Культуру анаэробного тест-штамма C.oedematiens 198 реактивируют двукратным пересевом в
пробирки с предварительно регенерированной средой Китт-Тароцци и инкубированием в течение 2
0 - 24 ч при (37 ± ) ’С.
4.1.2.2.3 Построение градуировочного графика
Готовят концентрированную суспензию бактериальной культуры с известным содержанием
микробных клеток и делают из нее разведения изотоническим раствором хлористого натрия или
питательной средой одним из следующих методов:
а) на плотную среду в пробирке или в чашке Петри высевают культуру тест-штамма, например
E.coli, объемом от 0.1 до 0,2 см\ культивируют 20 —24 ч в термостате, посте чего смывают культуру
небольшим количеством изотонического раствора хлористого натрия. Мутность полученной концент
рированной суспензии визуально сравнивают с мутностью оптического стандарта. Доводят мутность
суспензии домутностиоптического стандартадобавлением изотонического раствораили
бактериальной взвеси. Количество микробных клеток в полученной суспензии оценивают на основании
технического документа (ТД) на оптический стандарт мутности. Обычно оно соответствует примерно
I млрд/см5.
Из суспензии делают несколько разведений в соответствии с таблицей 1 (количество микроб
ных клеток в разведенных суспензиях рассчитано для содержания количества микробных клеток в
концентрированной суспензии, равного
1
млрд/см’);
Т аблица 1— Приготовление разведений
Объем ком центрированной суспензии,
ем1
Обьем и миопического раствора, см3
Количество микробных клеток в 1 см 1
суспензии
4
1
800000
3
2
600000
2
3
400000
1
4
200000
5