ГОСТ Р 51758-2001
Т абли ца4 —Приготовление рабочих суспензий клеток из концентрированной суспензии
Количество жизнеспособных клеток и 1 см 3 исходной
суспензии, млн/см*
Объем исходной суспензии клеток, необходимый
оля
получения 20 см3 рабочей суспензии, ем 1
9.0
10.0
п.о
12,0
1.33
1,20
1,09
1,00
,
Из каждой рабочей суспензии готовят рабочие образны с количеством клеток в 1см’: 0,5; 0,4;
0,3;
0,2
и
0,1
млн/см5, для чего к одному объему рабочих суспензий добавляют следующие объемы
тех же сред: 0,2; 0.5; 1; 2 и 5 соответственно.
Из рабочих суспензий клеток и каждого рабочего образна высевают по I см
5
в четыре пробирки
с испытуемой и четыре пробирки с контрольной питательной средой. Выращивают культуры клеток
при температуре (37.0 ± 0,5) *С без смены питательной среды в течение 7 сут. Процент роста монослоя
определяют через 7 сут микроскопнрованием образцов пробирочных культур (увеличение 70*).
6
.1.4 Оценка результатов
Ростовые свойства питательных сред в зависимости от процента роста монослоя оценивают по
четырехбалльной системе; монослойные образцы культур —в 4 балла; образцы с 25, 50 и 75 % роста
—соответственно в
1 2
и 3 балла.
По обшей сумме баллов во всех 24 пробирочных культурах питательную среду классифицируют
следующим образом: 1-й класс —65 —% баллов; 2-й класс —33 —64 балла и 3-й класс — 16 —32
балла. Испытуемые среды, получившие менее 16 баллов, бракуют как неактивные.
Испытуемые среды оценивают в том случае, если контрольная среда ССО-ГЛА или ССО-
ФГМС обеспечивает рост тест-кулыур при посевном количестве клеток в
1
см
3
от 0,1 до 0.2 млн/см
3
и имеет не менее 65 баллов. Впротивном случае испытания проводят с другим образцом контроль
ной среды. Примеры расчета ростовых свойств питательных сред для первичных культур клеток
приведены в таблице 5.
Т абли ца 5 —Примеры расчета ростовых свойств питательных сред
Посевное количество
Опенка роста, баллы
Номер пш агельиой
среды
AM Ilf«СПОСОБНЫХ
клеток в 1 см 1
суспензии, млн/см3
в пробиркеобшая
К.1ЛСС м н и т е л ь н о й
среды
1
0,64444801
0,54444
0.44444
0,34444
0 .2
4444
0,10000
0.64444562
0,54444
0.44444
0,33212
0.20000
0.10000
5
0,64444323
0.53322
0.41111
0,31100
0.2 0000
0,1 0000
Контроль
0,64444881
0.54444
0,44444
0,34444
0 ,2
4444
0,12222
15