ГОСТ ISO/TS 13136—2016
Калий фосфорнокислый двухзамещемный (К2НР04) — 4 г;
Соли желчных кислот № 3 - 1 , 5 г;
Дистиллированная вода — до 1000 см3;
pH (7.4 ± 0,2) ед. pH.
Процедура приготовления среды следующая: компоненты сухой питательной среды растворяют в
воде. Устанавливают pH на уровне (7.4 ± 0,2) ед. pH при температуре 25 °С и стерилизуют автоклави
рованием при температуре 121 °С в течение 15 мин.
5.1.1.2 Раствор новобиоцина
Состав раствора:
Новобиоцин — 0,16 г;
Вода — 10 см3.
Процедура приготовления раствора следующая: новобиоцин растворяют в воде и стерилизуют
путем мембранной фильтрации с помощью фильтров с размерами пор 0,22 мкм или 0,45 мкм.
Раствор готовят в день его использования.
5.1.1.3 Раствор акрифлавина
Состав раствора:
Акрифлавин — 0,12 г.
Вода — 10 см3.
Процедура приготовления раствора следующая: акрифлавин растворяют в воде и стерилизуют
путем мембранной фильтрации с помощью фильтров с размерами пор 0,22 мкм или 0,45 мкм.
Раствор готовят в день его использования.
5.1.1.4 Приготовление готовой питательной среды
Непосредственно перед использованием 1 см3 раствора новобиоцина (см. 5.1.1.2) или раствора
акрифлавина добавляют (см. 5.1.1.3) к 1000 см3 охлажденного бульона mTSB (см. 5.1.1.1).
Конечная концентрация новобиоцина в mTSB должна быть 16 мг/дм3.
Конечная концентрация акрифлавина в mTSB должна быть 12 мг/дм3.
5.1.2 Забуференная пептонная вода (BPW)
Состав и pH BPW:
Пептоны — 10 г;
Натрия хлорид — 5.0 г.
Натрий фосфорнокислый двухзамещенный двенадцативодный (Na2HP04 • 12 Н20 ) — 3,5 г;
Калий фосфорнокислый однозамещенный (КН2Р 04) — 1.5 г;
Вода — до 1000 см3;
pH (7,0 ± 0,2) ед. pH.
Процедура приготовления BPW следующая: компоненты сухой питательной среды растворяют в
воде. Устанавливают pH на уровне (7,0 ± 0,2) ед. pH при температуре 25 °С и стерилизуют автоклави
рованием при температуре 121 °С в течение 15 мин.
5.2 Реактивы для экстракции нуклеиновых кислот (ДНК)
Реактивы, используемые для экстракции нуклеиновых кислот, не приведены в настоящем пункте,
поскольку они могут быть разными в зависимости от используемого метода (см. 9.3).
5.3 Реактивы, используемые при проведении ПЦР
Используют реактивы, приведенные в ISO 20838.
5.3.1 О лигонуклеотиды (праймеры) и зонды обнаружения
Праймеры и зонды для обнаружения конкретных целевых последовательностей генов стандарт
ными методами ПЦР и методами ПЦР в режиме реального времени приведены в приложениях С и Е.
6 Оборудование и лабораторная посуда
Используют обычное оборудование, необходимое для микробиологической лаборатории (см.
ISO 7218) и. в частности, следующее.
6.1 Баня водяная или нагревательный блок, способные поддерживать температуру до 100 °С.
6.2 Термостат (см. ISO 7218), способный поддерживать температуру на уровне (37 ± 1) аС.
4