rOCTISO/TS 13136—2016
выделения, после чего проводят прямой посев на подходящую плотную среду и скрининг колоний на
наличие генов вирулентности.
Для подтверждения наличия генов вирулентности в выделенных колониях используют протоколы,
описывающие проведение стандартной ПЦР. ПЦР в режиме реального времени (см. приложения С и Е).
а также протокол проведения любого другого вида ПЦР. которая аналогична ранее указанным видам ПЦР.
Блок-схема выделения бактерий STEC приведена на рисунке В.1, а методика данной процеду
ры — в приложении F.
10 Интерпретация результатов
a) Пробы, не содержащие бактерий с stx-геном: в х г или х см3 анализируемой пробы STEC не
обнаружены (см. ISO 7218).
При отсутствии генов
stx,
проведение испытания прекращают и не проводят дальнейшего опреде
ления наличия гена
еае
и генов, присутствующих в серогруппах. приведенных в разделе 1.
В случае, когда не удалось провести выделение бактерий из проб, положительных на наличие
stx-генов. тогда:
b
) Пробы, положительные на наличие stx-генов: в х г или х см3 анализируемой пробы предполо
жительно обнаружены STEC.
c) Пробы, положительные на наличие генов
stx
и еае: в х г или х см3 анализируемой пробы пред
положительно обнаружены STEC. вызывающие повреждение путем прикрепления бактерий и разруше
ния ими щеточной каймы эпителия клеток кишечника.
d) Пробы, положительные на наличие генов
stx
и еае. а также генов, характерных для одной из
серогрупп. приведенных в разделе 1: в х г или х см3 анализируемой пробы предположительно обнару
жена серогруппа STEC XX1).
В случае, когда удалось провести выделение и подтверждение бактерий из проб, положительных
на наличие stx-генов, тогда:
e) Выделенные штаммы
Е. coti.
положительные на наличие stx-гена: наличие STEC в х г или х см3
анализируемой пробы.
0 Выделенные штаммы
Е. coti,
положительные на наличие генов
stx
и
еае:
в х г или х см3 анали
зируемой пробы обнаружены STEC. вызывающие повреждение путем прикрепления бактерий и раз
рушения ими щеточной каймы эпителия клеток кишечника.
д) Выделенные штаммы
Е. Coti,
положительные на наличие генов
stx
и
еае.
а также генов, харак
терных для одной из серогрупп. приведенных в разделе 1: обнаружена серогруппа STEC XX2’ в х г или
х см3 анализируемой пробы.
11 Эксплуатационные характеристики
11.1 Метод ПЦР в режиме реального времени, установленный в настоящем стандарте, прошел
процедуру валидационного исследования в соответствии с требованиями, приведенными в {17].
11.2 Чувствительность и предел обнаружения бактерий методом ПЦР в режиме реального време
ни были определены с помощью разведений плазмид, содержащих клонированные гены, кодирующие
специализированную экспрессию (см. [8]). Результаты данного исследования приведены в таблице 1.
Т а б ли ц а 1 — Чувствительность и предел обнаружения 5’-нукпеазы с помощью ПЦР для некоторых генов, рас
сматриваемых в настоящем стандарте (см. [8]).
Целевой ген
Предел обнаружения, количество копий sa реакцию
Эффективность. S4
Six
1
5
94.7
six2
5
94.0
rfbE
1
94.2
XX — это серогруппа с искомыми генами.
2> Серогруппа. выделенный штамм которой используют для обнаружения присутствия соответствующих ге
нов или при помощи фенотипичного определения.
7