ГОСТ ISO/TS 13136—2016
ISO 20838 Microbiology of food and animal feeding stuffs. Polymerase chain reaction (PCR) for the
detection of food-borne pathogens. Requirements for amplification and detection for qualitative methods (Ми
кробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) для
обнаружения патогенных микроорганизмов в пищевых продуктах. Требования к амплификации и детек
тированию для качественного анализа)
ISO 22174 Microbiology of food and animal feeding stuffs. Polymerase chain reaction (PCR) for the de
tection of food-borne pathogens. General requirements and definitions (Микробиология пищевых продуктов и
кормов для животных. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) для обнаружения патогенных микроорга
низмов в пищевых продуктах. Общие требования и определения)
3 Термины и определения
В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:
3.1
Escherichia coli.
продуцирующ ие Ш ига-токсин; STEC (Shiga toxin-producing
Escherichia coli
(STEC)]: Штаммы E.
coli.
имеющие гены, ответственные за синтез Шига-токсина
3.2
Escherichia coli,
продуцирующ ие Ш ига-токсин (STEC), вызываю щ ие повреждение пу
тем прикрепления бактерий и разрушения ими щеточной каймы эпителия клеток киш ечника (Shi
ga toxin-producing
Escherichia coli
causing the attaching and effacing lesion. STEC causing the attaching
and effacing lesion): Штаммы E.
coli.
имеющие гены, ответственные за синтез Шига-токсина и ген.
ответ ственный за синтез интимина (еае).
П р и м е ч а н и е — Данная комбинация генов вирулентности часто бывает причиной наиболее тяжелых
форм болезней, вызванных STEC.
3.3
Escherichia coll,
продуцирующ ие Ш ига-токсин (STEC), серогруппы которых являются
высокопатогенны ми (Shiga toxin-producing
Escherichia coli
belonging to highly pathogenic serogroups,
STEC belonging to highly pathogenic serogroups): Штаммы E.
coli.
имеющие гены, ответственные за син
тез Шига-токсина. ген. ответственный за синтез интимина
(еае)
и относящиеся к серогруппам
0157, 0111.026. 0103 и 0145.
4 Сущность метода
4.1 Общие положения
Используемый метод состоит из следующих последовательных этапов:
a) микробное обогащение;
b
) выделение нуклеиновых кислот (ДНК);
c) выявление генов вирулентности;
d) выявление генов, присутствующих в серогруппах;
e) селекция из положительных проб.
П р и м е ч а н и е — Блок-схема проведения исследования представлена на рисунке А.1.
4.2 Микробное обогащение
Бактерии STEC выявляют после увеличения их количества путем инкубирования анализируемой
пробы в неселективной жидкой питательной среде, например:
a) модифицированный триптон-соевый бульон (трилтон-соевый бульон с добавлением соли желч
ных кислот № 3. концентрация которой — 1,5 г/дм3, и добавлением новобиоцииа. концентрация которо
го — 16 мг/дм3) — mTSB+N,
b) забуференная пептонная вода (BPW);
c) модифицированный триптон-соевый бульон (триптон-соевый бульон с добавлением соли желч
ных кислот Ne 3, концентрация которой — 1.5 г/дм3, и добавлением акрифлавина. концентрация кото
рого — 12 мг/дм3) — mTSB+A, для анализа молока и молочных продуктов.
mTSB используют при анализе проб, предположительно содержащих большие количества неце
левых микроорганизмов.
Новобиоцин и акрифлавин подавляют рост грамлоложительных бактерий и способствуют росту
грамотрицательных бактерий, в том числе STEC.
2