ГОСТ 33379—2015
8.5 Определенно бактерий рода Salmonella (сальмонелл)
8.5.1 Метод выявления наличия сальмонелл в органических удобрениях основан на высеве ми
кробной суспензии органического удобрения в жидкую неселективную среду, инкубировании посевов,
последующем накоплении бактерий в жидких селективных средах, выявлении бактерий, образующих
типичные колонии на агаризованных дифференциально-диагностических средах, имеющих типичные
для бактерий рода Salmonella биохимические и серологические характеристики.
8.5.2 Из лабораторной пробы органического удобрения отбирают 55.5 г. добавляют 500 см3 сте
рильной неселективной среды обогащения — пептонной воды. Посевы инкубируют при температуре 37
°С в течение 24 ч.
Одновременно делают посев материала из указанной среды до ее инкубирования на дифферен
циально-диагностические среды — висмут-сульфит агар. Инкубируют посевы при температуре 37 °С в
течение 48 ч.
После инкубирования посевов на неселективной среде обогащения проводят посев материала
в магниевую среду обогащения из расчета 1 см3 надосадочной жидкости на 10 см3 магниевой среды.
Следует учитывать, что магниевая среда угнетает рост сальмонелл тифа, поэтому при подозре
нии на их наличие магниевую среду заменяют на селенитовый бульон, а висмут-сульфит агар — на
среду Плоскирева или среду Эндо.
Суспензию с магниевой средой инкубируют в течение 18—20 ч при температуре 37 °С.
Материал, прошедший инкубацию в магниевой среде, высевают на чашки Петри с дифференци
ально-диагностическими средами — висмут-сульфит агаром, средой Эндо, средой Плоскирева и сре
дой Левина. Посевы инкубируют при температуре 37 °С в течение 24—48 ч.
После инкубирования посевов на дифференциально-диагностических средах отмечают рост ко
лоний. характерных для бактерий рода Salmonella:
- на висмут-сульфит агаре — черные колонии с характерным металлическим блеском, а также
зеленоватые с темно-зеленым ободком и с пигментированием среды под колонией;
- среде Эндо — круглые бесцветные или слегка розоватые прозрачные колонии;
- среде Плоскирева — бесцветные прозрачные колонии, но более плотные, чем на среде Эндо;
- среде Левина — прозрачные, светло-розовые или розовато-фиолетовые колонии.
При отсутствии в посевах на дифференциально-диагностических средах характерных для бак
терий рода Salmonella колоний дают заключение об их отсутствии в анализируемой пробе. При на
личии хотя бы на одной дифференциально-диагностической среде характерных для бактерий рода
Salmonella колоний проводят их дальнейшую идентификацию по 8.5.3.
8.5.3 Идентификация сальмонелл
8.5.3.1Не менее трех типичных колоний с каждой дифференциально-диагностической среды (в
случае наличия одной-двух типичных колоний — каждую из них) пересевают на скошенную поверх
ность МПА и среду из сухого питательного агара. Часть этих колоний пересевают штрихом по поверх
ности и уколом в столбик TSI-arapa. Посевы инкубируют в термостате при температуре 37 °С в течение 24
ч и проводят идентификацию сальмонелл в соответствии с таблицей 1.
Т аб лиц а 1 — Идентификация сальмонелл
Идентификационные показателиПитательные среды, реактивыРеакция сальмонелл
фиолетовый, раствор Люголя, этиловый спирт,
фуксин
Окраска по ГрамуГенциановый карболовый или кристаллическийГрамотрицательны
Наличие активной оксидазы
СИБ-оксидаза. тетраметил-п-фенилендиамин ги
дрохлорид. фенкпендиаминовое соединение
Оксидазоогрицательны
Ферментация лактозы
СИБ-лакгоза, трвхсахарный агар (TSI-arap). агар
Ольквницкого или агар Клиглера
Лактоэоотрицательны
Ферментация глюкозы с обра
зованием кислоты или кисло
ты и газа
Трвхсахарный агар (TSI-arap) или агар Олькениц-
кого, или агар Клиглера. среда Гисса с глюкозой,
столбики трвхсахарного агара (TSI-arapa)
Глкжозололожитепьны
СпособностьобразовыватьТрехсахарный агар (TSI-arap). агар Ольквницкого
сероводород
Образуют сероводород
19