ГОСТ 33379—2015
Если на двух чашках Петри имеет место рост расплывчатых колоний, не распространяющийся на
всю поверхность чашки Петри, или выросло более 300 изолированных колоний и анализ нельзя повто
рить, подсчитывают сектор чашки Петри с хорошо дифференцированными, отдельно расположенными
колониями с последующим пересчетом на всю поверхность. В этих случаях в протоколе отмечают, что
число КОЕ в 1 см3— ориентировочное.
Если подсчет колоний на чашках Петри невозможен, то в протоколе отмечают: «сплошной рост».
8.2.2Для обнаружения аэробных слорообразующих микроорганизмов разведения прогревают в
течение 30 мин на водяной бане при температуре 65 °С или в течение 15 мин при температуре 80 SC,
а затем засевают в МПБ в пробирки или на две-три чашки Петри с МПА. Посевы инкубируют в течение 48
ч при температуре 37 °С. Наличие колоний на МПА (в основном рода Bacillus) и помутнение МПБ
свидетельствуют о присутствии спор аэробных микроорганизмов.
8.3 Определение патогенных клостридий
8.3.1 Метод основан на выращивании посевов в железо-сульфитном агаре в условиях, прибли
женных к анаэробным, и подсчете числа выросших черных колоний.
Из каждого разведения (от первого до шестого-восьмого) вдва ряда параллельных нестерильных
пробирок переносят по 1 см3 суспензии. Один ряд пробирок прогревают на водяной бане при темпе
ратуре 80 °С в течение 15 мин или при температуре 90 °С в течение 10 мин. Затем во все пробирки
наливают по 9—10 см3свежеприготовленной среды Вильсоиа-Блера или сульфит-полимиксин-неоми-
циновую среду для определения Clostridium perfringens. Пробирки закрывают стерильными ватно-мар
левыми пробками и инкубируют при температуре 37 °С в течение 18— 24 ч.
Патогенные клостридии растут в виде черных колоний, часто давая почернение всего столбика
среды. Газообразование, особенно при росте Clostridium perfringens, приводит к разрывам столбика
среды.
Титр патогенных клостридий в органических удобрениях определяют по наибольшему разведе
нию. в котором обнаружены колонии черного цвета и газообразование.
Биохимическую идентификацию клостридий, в случае необходимости, проводят по ГОСТ 31744.
8.4 Определение бактерий группы кишечных палочек
8.4.1 Определение бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий) основано на вы
севе суспензии пробы органического удобрения вжидкую селективную среду, содержащую лактозу, для
определения сбраживающей способности бактерий по образованию кислоты и газа и. при необходимо
сти, пересева культуральной жидкости на поверхность плотных специальных агаризованных сред для
подтверждения принадлежности по культуральным и биохимическим признакам выделенных колоний к
колиформным бактериям.
Определение коли-титра (коли-индекса) проводят с использованием жидких селективных сред
Кесслера-Свенертона. глюкозо-пептонного или лактозного бульона с ТТХ с последующей их идентифи
кацией.
8.4.2 Из первого разведения пробы органических удобрений (1:10) стерильной пипеткой берут
10 см3 суспензии и засевают во флаконы вместимостью 100 см3 с 50 см3 жидкой селективной среды,
что соответствует посеву 1 г. Посев меньших количеств органического удобрения (0,1; 0.01; 0.001 и
т.д.) осуществляют по 1 см3 из соответствующих разведений в стерильные пробирки вместимостью
15 см3с 8— 10 см3 жидкой селективной среды.
Посевы на среде Кесслера-Свенертона инкубируют в течение 48 ч при температуре 37 °С или
43 °С. О наличии бактерий группы кишечных палочек судят по газообразованию и помутнению среды.
При появлении более чем через 48 ч газообразования и помутнения или только помутнения среды
Кесслер-Свенертона проводят посев на среду Эндо, или среду Левина, или розоловый агар. Для этого из
флаконов, где отмечено изменение среды, культуральную жидкость петлей высевают штрихами на
поверхность среды, разлитой в чашки Петри и разделенной на три-четыре сектора. Чашки с посевом
помещают в термостат на 24 ч при температуре 37 °С.
По отсутствию роста на среде в чашках Петри дают окончательное заключение об отсутствии
БГКП.
Типичными для БГКП являются красные и/или розовые колонии с металлическим блеском или
без него — на среде Эндо: желтые или оранжевые — на розоловом агаре: черные с металлическим
блеском, темные с черным центром, сиреневые с темным центром — на среде Левина.
17