ГОСТ 33379—2015
три-пять штук на середину листа плотной бумаги, два противоположных края которой загибают. В пло
ские (верхние) концы пипеток вставляют ватные тампоны. Пипетки и шпатели стерилизуют завернуты ми
в бумагу или в футляре (пенале) для стерилизации. По окончании стерилизации сушильный шкаф не
открывают до снижения температуры до 75 °С — 100 °С. так как под действием холодного воздуха стекло
может лопнуть.
6.2.5 Мелкие металлические инструменты (иглы, пинцеты, петли, ножницы), а также стеклянные
палочки, горлышки колб, пробирок, бутылок стерилизуют прокаливанием (фламбированием) впламени
горелки непосредственно перед использованием. Также в пламени горелки кратковременно обжигают
ватные пробки при пересеве культур и разливе сред.
6.2.6 Питательные среды и другие лабораторные материалы стерилизуют насыщенным паром
под давлением (автоклавированием), так как при этом способе стерилизации погибают как вегетатив
ные клетки, так и споры микроорганизмов.
6.2.7 Перед стерилизацией питательных сред посуду (колбы, бутылки, пробирки) заполняют на
половину объема и закрывают ватными пробками, а сверху плотной (пергаментной, крафт) бумагой и
обвязывают шпагатом, что позволяет избежать увлажнения пробок водой, сконденсировавшейся на
внутренней поверхности крышки автоклава. Нельзя обертывать пробки сосудов целлофаном, фольгой и
другими материалами, не пропускающими пар. Длительность и температура стерилизации определя
ется составом питательной среды, химическим составом материала и целью анализа.
6.2.8 Способы стерилизации питательных сред, посуды, полиэтиленовой пленки и других лабора
торных материалов, а также зависимость продолжительности стерилизации жидкостей от вместимости
посуды приведены в приложении Б.
6.3Приготовление сред и реактивов
6.3.1 Общие требования
6.3.1.1 Питательные среды готовят и стерилизуют в соответствии с требованиями ГОСТ ISO/TS
11133-1 и ГОСТ ISO 11133-2.
6.3.1.2 Питательные среды промышленного производства готовят в соответствии с этикеткой или
прописью.
Если не указано иное, то готовые среды хранят всухих, защищенных от прямого солнечного света,
помещениях при температуре от 2 °С до 25°С в специальных широкогорлых колбах из термостойкого
стекла для стерилизации и хранения питательных сред вместимостью 500 см3 с герметично завинчива
ющимися крышками, либо в холодильнике в колбах, снабженных ватными пробками, при температуре от
2 °С до 5“С.
6.3.1.3 pH питательных сред доводят до необходимых значений растворами гидроокиси натрия
или соляной кислоты молярной концентрации 1 мольУдм3, измеряя значение рН-метром.
6.3.2 Приготовление сред
6.3.2.1 Приготовление питательного агара
Берут 3 г сухого мясного экстракта. 5 г пептона. 9—18 г сухого питательного агара, высыпают в
1000 см3дистиллированной, либо водопроводной воды, тщательно перемешивают и кипятят на слабом
огне до полного расплавления агара. Устанавливают pH среды 7,0—7.2. Расплавленный раствор
стери лизуют в автоклаве в течение 15 мин при температуре (121 ± 1) °С.
Питательный агар из сухого препарата промышленного производства по ГОСТ 17206 готовят всо
ответствии с этикеткой или следующим способом.
Берут 50 г сухого питательного агара, высыпают в 1000 см3холодной водопроводной воды, тща
тельно перемешивают и кипятят на слабом огне в течение 1—2 мин до полного расплавления агара, не
допуская пригорания в закрытом сосуде. Устанавливают pH среды 7,0—7.2. Расплавленный раствор
фильтруют через вату, разливают в пробирки, флаконы или колбы и стерилизуют в течение 20 мин при
температуре (121 ± 1) °С.
Срок хранения готового расплавленного питательного агара — не более 8 ч. готового питательно
го агара при температуре от 2 °С до 8 °С — не более 10 сут.
6.3.2.2 Приготовление полужидкого питательного агара
Берут 15 г сухого питательного бульона. 3 г микробиологического агара, растворяют в 1000 см3
дистиллированной воды при нагревании при температуре 100 °С. Доводят pH до 7.0—7.2, разливают в
пробирки и стерилизуют в автоклаве при температуре 121 °С в течение 15 мин.
Срок хранения среды при температуре от 2 °С до 8 °С — не более 2 мес.
9