ГОСТ 33379—2015
8.1.1.2 Анализируемую пробу переносят в колбу с 90 см3стерильной жидкости для разведения. В
качестве жидкости для разведения используют стерильную водопроводную воду или физиологический
раствор (0,85 %-мый раствор хлористого натрия по ГОСТ 4233).
Параллельно в металлические или стеклянные бюксы отбирают анализируемые пробы для опре
деления влажности по ГОСТ 26713.
Колбы с органическим удобрением помещают на аппарат для встряхивания или гомогенизатор
(смеситель) и встряхивают в течение 15 мим. предварительно заменив ватные пробки на резиновые. По
окончании встряхивания приступают к проведению анализа, который включает приготовление раз-
ведений. проведение посева и учет количества колоний.
8.1.1.3 Разведение осуществляют в ряде пробирок, содержащих по 9 см3жидкости для разведе
ния. используя постоянный коэффициент разведения, равный 10.
Количество разведений подбирают опытным путем с учетом вида органического удобрения. Колбу
с суспензией после встряхивания по 8.1.1.2 оставляют на 30 с для оседания крупных частиц. Стериль
ной пипеткой отбирают 1 см3суспензии (не прикасаясь ко дну колбы), переносят ее в пробирку с 9 см3
жидкости для разведения. Суспензию в первой пробирке тщательно перемешивают другой стерильной
пипеткой, для чего в пипетку забирают и вновь возвращают в пробирку ее содержимое. Перемешива
ние суспензии повторяют не менее 10 раз. Затем из первой пробирки аналогичным образом отбирают
1 см3, переносят во вторую пробирку и т. д.. таким образом готовят все последующие разведения.
1 см3суспензии вколбе по 8.1.1.2 соответствует разведению 10’1. впервой пробирке — 10"2и т.д.
Пробирки и колбы заранее нумеруют с указанием номера пробы и степени разведения. Схема приго
товления разведений и посева суспензии приведена в приложении В.
8.1.1.4 При планировании посева на большое количество питательных сред 9 см3суспензии будет
недостаточно. В этом случае ряд разведений готовят в колбах или бутылях вместимостью 250 см3 с 90
см3стерильной жидкости для разведения в каждой. Разведения готовят аналогично 8.1.1.3. при этом из
первой и последующих колб (бутылей) берут по 10 см3 суспензии, предварительно их встряхивая в
течение 1 мин. Использованные пипетки помещают в фарфоровую кружку, на дно которой кладут вату и
наливают немного жидкости для разведения.
8.1.2 Посов микроорганизмов
8.1.2.1 Полученную по 8.1.1.3 или 8.1.1.4 суспензию высевают в чашки Петри на плотные пита
тельные среды поверхностным или глубинным способом.
8.1.2.2 Расплавленную и охлажденную до температуры 45 °С — 50 °С агаризованную среду разли
вают по 15—20 см3в чашки Петри, находящиеся на горизонтальной поверхности, для получения ровно
го слоя застывшей среды. После этого чашки Петри помещают в предварительно протертый 70 %-ным
этиловым спиртом и нагретый до температуры 65 °С — 70 °С сушильный шкаф на 15—20 мин. По исте
чении времени в сушильном шкафу чашки Петри переворачивают вверх дном, открывают и ставят
под углом 45° на крышку и подсушивают для удаления конденсационной воды до появления
«муарового» рисунка на поверхности среды. Развившиеся колонии микроорганизмов на таких чашках
не расплыва ются и не сольются друг с другом.
Тщательно перемешав суспензию в пробирке или колбе (бутылке), стерильной пипеткой на по
верхность среды наносят точно измеренный объем (0,05 или 0,10 см3) соответствующего разведения,
затем быстро и тщательно его растирают стерильным стеклянным шпателем по всей поверхности
среды. Посов осуществляют из двух или трех последовательных разведений в целях проведения бо
лее точного подсчета количества микроорганизмов в органическом удобрении. Из каждого разведения
засевают по три-пять параллельных чашек. Для каждого разведения используют новый стерильный
шпатель. После посева чашки Петри переворачивают крышками вниз и инкубируют в термостате при
определенной температуре необходимое время.
8.1.2.3 При глубинном посеве 0.5 или 1.0 см3 суспензии из соответствующего разведения пере
носят стерильной пипеткой в три-пять стерильных чашек Петри, затем заливают расплавленной и ох
лажденной до температуры 45 °С — 50 °С средой и перемешивают легким вращательным движением.
После застывания среды чашки Петри помещают в термостат.
8.1.2.4 Для микроорганизмов, которые плохо или совсем не развиваются на плотных питательных
средах, используют посев в жидкие среды (метод предельных разведений). Этот метод применяют так же
при определении числа бактерий разных физиологических групп.
В пробирки с жидкой средой вносят по 1 см3 из различных разведений. Посев проводят из каждо
го разведения или четырех-пяти последних разведений, высевая в три-пять параллельных пробирок.
Посев одной анализируемой пробы можно выполнять одной стерильной пипеткой, начиная с большего
разведения.
14