ГО С Т 32903— 2014
- атмосферное давление ..............................................................(97 ± 10) кЛа:
- относительная влажность ........................................................от 40 % до 90 % ;
- напряжение в питающей сети ...................................................(220 ± 20) В;
- частота тока в питающей се ти ..................................................(50 ♦ 1) Гц.
Помещение, в котором проводят работы с реактивами, должно быть обеспечено приточно-
вытяжной вентиляцией.
Все операции с реактивами следует проводить в вытяжном шкафу.
6 Метод определения содержания витаминов В1, В6 и РР с помощью об-
ращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии со
спектрофотометрическим детектором (метод А)
6.1 Сущ ность метода
Метод основан на разделении группы водорастворимых витаминов на твердом носителе С 1В,
привитом на высокочистую смликагелевую основу и дополнительными полярными группами с корот кой
цепочкой (изопропил) по обращенно-фазовому механизму.
Идентификацию и количественный расчет пиков разделенных витаминов проводят при индиви
дуальных максимумах светопоглощения в ультрафиолетовой области спектра сопоставлением со
временем удерживания пиков в градуировочных растворах.
Т а б л и ц а 1 - Параметры идентификации витаминов В,. Вви РР
Витамин
Время удерживания,
мин
Длина волны >., нм.
при максимуме
светопоглощения
Тиамин (В ()
3.7 ± 0.2
245 ±2
Пиридоксин (В6)
5,7 ±0,3
290 ±2
Никотинамид (РР)
7.0 ± 0.4
261 ±2
П р и м е ч а н и е - При определении витамина В, необходимо принимать во внимание матричное влияние
сахаров и кислот. Для учета матричного влияния кислот и сахаров приготовление градуировочных растворов
проводят с использованием матричного раствора (см. приложение Б). Содержание данных компонентов, на
порядки превышающее содержание витамина Bi. приводит к смещению максимума поглощения последнего в
область 254-264 нм. В большинстве случаев максимум поглощения витамина В- под влиянием кислот и саха ров
обнаруживается при 256.2 нм (см. приложение В).
6.2 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, реактивы и материалы
Хроматограф жидкостной с насосом высокого давления, спектрофотометрическим детектором,
позволяющим проводить измерения оптической плотности с программируемой длиной волны в диа
пазоне 190-600 нм и характеристиками, указанными в таблице 2. или диодноматричным детектором,
позволяющим проводить измерения оптической плотности на нескольких длинах волн в диапазоне от
190 до 800 нм, и характеристиками, указанными в таблице 3.
Т а б л и ц а 2 - Рекомендуемые технические и метрологические характеристики для спектрофото-
метрического детектора________________________________________________________________________________________
Технические характеристики при 254 нм
Метрологические характеристики
Относительное среднеквадратическое отклонение. %
дрейф ну
левого сиг
нала,
не более
предел детек
тирования
по фенолу,
не более
по площади
пика,
не более
по высоте
пика,
не более
по времени
удержи
вания,
не более
по площади
пика за 8 ч
непрерывной
работы,не
более
уровень флук-
туационных шу
мов нулевого
сигнала,
не более
1,510-°
е. о. п.
5 1 0 "
е. о. п./ч
7 Ю -10г/см3
5
5
1
4
3