ГО С Т 32903— 2014
Приложение Г
(обязательное)
Определение эффективности хроматографической колонки
Проверку оптимальности выбранных хроматографических условий (характеристик колонки) проводят по
основным характеристикам, приведенным в таблицах Г.1 - Г.З с применением рабочего градуировочного раство ра
№4.
Т а б л и ц а Г. 1- Основные характеристики разделения витаминов В,, Bt. РР
Витамин
Тиамин (В,)
Пиридоксин (В*)
Никотинамид (РР)
Время удержива
ния
t
*. мин
3.6 ±0
2
5.7 ±0.3
7.0 ±0.4
Число теоретичес
ких тарелок
N
5184
472
544
Коэффи-циент ем
кости к’
0.24
0.97
1.41
Разрешение
R,
0.36‘
1.95
1.16
П р и м е ч а н и е - Разрешение хроматографического пика для витамина Bt дано по отношению к витамину С
(см. рисунок В.5). который определяют по ГОСТ 31643. Для остальных витаминов - разрешение дано по
ближайшему пику.
Т а б л и ц а Г.2 - Основные характеристики разделения витамина В,
Компонент
Число теоретичес
ких тарелок
N
Коэффициент
Ассиметрии,
А,
Тиамин (Bt)
Время удерживания
(ч. мин
5.05 ± 0,25
7226
1.1
Т а б л и ц а Г.З - Основные характеристики разделения витаминов В? и В«
Компонент
Число теоретиче
ских тарелок
N
Коэффициент ассиметрии
А,
Пиридоксин (B.J
Рибофлавин (В;)
Время удерживания
(ч, мин
5.00 ± 0,25
24.0 ± 1.2
6471
113771
0.99
0.72
Время удерживания соответствующего компонента определяют непосредственно из хроматограмм двух
параллельных измерений.
В случав обнаружения отклонения времени удерживания болев чем на 5 % для любого из витаминов,
строят новую градуировочную зависимость во всем диапазоне измерений.
Число теоретических тарелок вычисляют по формуле
<Г 1 >
где
1я-
время удерживания пика витамина Bt. мин;
W0-
ширина пика витамина Bi у основания, мин.
Колонка считается удовлетворительной при значении числа теоретических тарелок не ниже 10 % от ука
занного в таблице.
Разрешение между двумя хроматографическими пиками
Rs
вычисляют по формуле
(Г-2)
И’ы +И’л:
где
1*2
-
время удерживания витамина С. мин;
(иI - время удерживания витамина Bt. мин;
W
m
,
Wta-
ширина пика витамина С и витамина Bt у основания, мм.
Колонка считается удовлетворительной при значениях
R, г
0.34.
Коэффициент емкости вычисляют по формуле
(Г.З)
где
Гм-
приведенное время удерживания витамина Bt. мин;
(м- мертвое время удерживания витамина В,, мин.
Колонка считается удовлетворительной при значении коэффициента емкости, не превышающем 10 % от
указанного в таблице.
При невозможности достижения требуемых условий эффективности хроматографического разделения
проводят определения друшх хроматографических колонок аналогичным образом.
Контроль эффективности хроматографического разделения проводят не реже одного раза в месяц.
24