ГОСТ Р 56201—2014
Пробирки, флаконы, бутылки, колбы закрывают ватно-марлевыми пробками. Поверх пробки
(кроме пробирок) надевают бумажный колпачок, который обвязывают вокруг горлышка ниткой или
закрепляют резиновым колечком.
Каучуковые, корковые и стеклянные пробки стерилизуют отдельно в автоклаве, упакованными в
бумагу.
Стерильную посуду хранят в плотно закрывающихся шкафах или ящиках с крышками. Срок
хранения стерильной посуды - не более 30 сут при ненарушенной упаковке или в невскрытых пена лах.
4.6.2 Приготовление буферных растворов
4.6.2.1 Фосфатный буферный раствор
Для приготовления концентрированного фосфатного буферного растора (34 ± 0.4) г одноэаме-
щенного фосфорнокислого калия (КН2Р04) растворяют в объеме от 500.0 до 700.0 см3дистиллиро
ванной воды в мерном колбе, вместимостью 1000 см3по ГОСТ 1770. Устанавливают активную кислот
ность раствора (7.2 ± 0.1) ед. pH добавлением раствора гидроокиси натрия и доводят дистиллиро
ванной водой до 1000.0 см3. Хранят в емкости, укупоренной резиновой пробкой, в условиях холо
дильника не более 30 сут.
Для приготовления разбавленного раствора 1.25 см3 концентрированного фосфатного буфер
ного раствора вносят пипеткой в мерную колбу вместимостью 1000 см3по ГОСТ 1770 и доводят объ
ем дистиллированной водой до метки, проверяют активную кислотность, которая должна
составлять (7,1 ± 0.1) ед. pH.
Фосфатный буферный раствор разливают по 9.0 см2в пробирки, по 100.0 см2в колбы, вмести
мостью 200 см3по ГОСТ 25336. и по 900.0 см3 в колбы, вместимостью 2000 см3 по ГОСТ 25336. за
крывают ватными пробками. Стерилизуют в автоклаве при (121 ± 1) °С в течение (20 ± 1) мин.
4.6.2.2 Фосфатно-тиогликолевый буферный раствор
Состав (г (см3)/дм3):
калия дигидрофосфат (КН2Р04) - 4.5 г,
натрий фосфорнокислый 2-замещенный 12-водный - 6.0 г:
агар-агар -1.0 г;
тиогликолевая кислота - 0.4 см3.
1,0г агар-агара. 6.0 г натрия гидрофосфата и 4.5 г калия дигидрофосфата растворяют при на
гревании в 100 см’ дистиллированной воды. Остужают, пипеткой добавляют 0.4 см3 тиогликолевой
кислоты, устанавливают активную кислотность раствора (6.8 ± 0.1) ед. pH и доводят объем смеси до
1000 см3. Разливают фосфатно-тиогликолевый буферный раствор по 9.0 см3в пробирки, по 100.0 см3
в колбы, вместимостью 200 см3, и по 900.0 см3 в колбы, вместимостью 2000 см3, закрывают ватными
пробками. Стерилизуют автоклавированием при (112 ♦ 1) °С в течение 5 мин.
Перед употреблением фосфатно-тиогликолевый буферный раствор разогревают на кипящей
водяной бане в течение 15 мин для снижения в нем содержания растворенного кислорода. В момент
использования температура раствора должна составлять (38 ± 1) °С.
4.6.2.3 Раствор лимоннокислого натрия
В 1000,0 см3 дистиллированной воды растворяют 20 г трехзамещенного лимоннокислого на
трия. разливают в пробирки по 9.0 см3или колбы; стерилизуют автоклавированием при (121 ± 1) °С в
течение (20 ± 1) мин.
4.6.2.4 Цитратно-фосфатный буферный раствор
Цитратно-фосфатный буферный раствор (ЦФБР) с pH в диапазоне от 2.2 до 7.0 получают сме
шиванием двух исходных растворов; натрия гидрофосфата 2-водного (Na2HP042Н20 ) с молярной
концентрацией 0.2 моль/дм3(35.63 г/дм3) и моногидрата лимонной кислоты (С3Н40Н(С00Н)з Н20) с
молярной концентрацией 0.1 моль/дм3(21.01 г/дм3). Объемы исходных растворов варьируют в зави
симости от заданного значения pH ЦФБР. Соотношения исходных растворов приведены в приложе
нии В.
Приготовленные растворы ЦФБР стерилизуют автоклавированием при температуре (121 ± 1) вС
в течение 15 мин.
4.6.3 Приготовление питательных сред для культивирования пробиотических микроор
ганизмов
4.6.3.1 Питательные среды для культивирования бактерий рода
Lactobacillus
а) Среда МРС (MRS) жидкая - по ГОСТ10444.11.
б) Среда МРС (MRS) агаризованная - по ГОСТ 10444.11.
Для повышения селективности питательной среды, после стерилизации к 1 дм3 агаризованиой
или жидкой среды добавляют 1 см3щелочного раствора сорбиновой кислоты.
в) Щелочной раствор сорбиновой кислоты
7