ГОСТ Р 56201—2014
5.2.4 Обработка результатов определения бифидогенных свойств
in vitro 2
Для определения наличия бифидогенных свойств функционального пищевого продукта сопос
тавляют индексы выживаемости тест-штамма(ов) бактерий рода
Bifidobacterium,
полученные в трех
независимых опытах при 2-3-х кратном повторении измерений по 5.2.2. Для выявления статистиче
ской значимости различий между ИВ
Bifidobacterium spp
в модели, где рост тест-штамма был индуци
рован присутствием функционального пищевого продукта, и ИВ интактного тест-штамма, используют
непараметрический (/-критерий Манна-Уитни для независимых переменных’. Различия между анали
зируемыми величинами считают достоверными при уровне значимости
р
< 0,05.
Наличие у функционального пищевого продукта бифидогенных свойств признают при обнару
жении ИВ. достоверно подтверждающего выживание на конечном этапе в модели «тонкой кишки»
более, чем 60 % от исходного количества тест-микроорганизмов
Bifidobacterium spp.
внесенных в мо
дель «желудка», и при выявлении у них кислотообразующей способности, которая соответствует
ис ходной или более высокой степени, но составляет значения не выше, чем 4.8 ед. pH среды
культиви рования.
5.3 Метод определения бифидогенных свойств
in vivo
5.3.1 Сущность метода
Анализ бифидогенных свойств функционального пищевого продукта в условиях
in vivo
прово
дят на основании изучения видового состава и количественных уровней основных защитных популя
ций нормальной микрофлоры кишечника и их функциональной активности. Для этого производят по сев
содержимого толстого кишечника лабораторных животных, получавших функциональный пищевой
продукт с кормом, при сравнении с интактными контрольными животными.
5.3.2 Проведение анализа
5.3.2.1 Анализ
in vivo
бифидогенных свойств функционального пищевого продукта проводят пу
тем посевов содержимого толстого кишечника лабораторных животных, которым вводят в рацион
функциональный пищевой продукт, при сравнении с животными, которым вводят функциональный
пищевой ингредиент с пребиотическим действием (например, полифруктозанинулин), и контрольны
ми животными, которые получают базовый полусиитетический рацион (см. приложение Б).
Проводят изучение защитных популяций микрофлоры (
Bifidobacterium spp.. Lactobacillus spp.
лактоэоферментирующих бактерий семейства
Enterobacteriaceae),
а также комменсальных и транзи-
торных (условно-патогенных) представителей микробиоты (цитратположительных
Enterobacteriaceae,
Enterococcus spp.. Bacteroides spp.,
сульфитредуцирующих бактерий рода
Clostridium,
бактерии рода
Proteus. Staphylococcus aureus,
дрожжей и плесневых грибов) на соответствующих дифференциаль но-
диагностических и селективных средах. Изучение комменсальных и транзиторных популяций не
обходимо для оценки способности
Bifidobacterium spp.
регулировать баланс микроорганизмов в мик
рофлоре кишечника.
5.3.2.2 Приготовление суспензии содержимого слепой кишки (фекалий) животных
Пробу для анализа из содержимого слепой кишки крыс около 1 г (взвешивают на электронных
весах на стерильной подложке) вносят в предварительно регенерированный тиогликолево-
фосфатный буфер с 0.1 % агара в соотношении 1:9. Полученную взвесь тщательно гомогенизируют
и готовят из нее последовательные десятикратные разведения в фосфатно-тиогликолевом буфере
от 10 ^до Ю’10. Все пробирки с разведениями суспензии перемешивают вручную круговыми
движениями руки при согнутом локтевом суставе
Подготовленные разведения используют для посева на дифференциально-диагностические и
селективные среды для количественного учета девяти групп микроорганизмов - представителей за
щитной микрофлоры и представителей транзитормой (сопутствующей) микрофлоры.
5.3.2.3 Проведение количественного микробиологического посева
Суспензию содержимого слепой кишки высевают непосредственно на поверхность плотных пи
тательных среди или в жидкие среды в соответствии со схемой, приведенной в таблице 3. Из соответ
ствующих разведений по 0.05 см3суспензии распределяют с помощью шпателя или бактериологиче
ской петли по поверхности агаризованной среды в чашке Петри. Допускается посев на
’А
часть чашки
Петри. В жидкие и полужидкие питательные среды вносят по 1 см3суспензии.
‘ (/-критерий Манна - Уитни - статистический критерий, используемый для оценки различий между двумя
независимыми выборками по уровню какого-либо признака, измеренного количественно. Применяется для срав
нения малых выборок.
15