ГОСТ Р 56201—2014
стерилизации при 25 °С он составлял (6,5 ± 0,1) ед. pH. Разливают колбы и стерилизуют при (121 ± 1)
°С в течение 15 мин. Готовую среду хранят в холодильнике не более 14 сут.
4.6.11.2 Приготовление рисового агара для определения хламидоспор дрожжеподобных грибов
20 г белого риса заливают 1,0 дм3дистиллированной воды, доводят до кипения, затем выдер
живают на малом огне 45 мин, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, доводят объем водой до 1
дм3, вносят 18-20 г агара, растворяя его кипячением. Среду разливают в пробирки и стерилизуют при
(121 ± 1) °С в течение 15 мин. Готовую среду хранят в холодильнике не более 14 сут. перед посевом среду
расплавляют в кипящей водяной бане, переливают в чашки Петри. Чашки со средой подсуши вают в
термостате по ГОСТ ISO 11133-1.
4.6.12 Приготовление растворов и реактивов
4.6.12.1 Стерильная дистиллированная вода
Дистиллированную воду разливают в колбы или пробирки в необходимых количествах и стери
лизуют в течение 20 мин при (121 ± 1) °С.
4.6.12.2 Раствор натрия гидрокарбоната для нейтрализации проб 10 г гидрокарбоната натрия
помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3, растворяют дистиллированной водой, доводят
объем раствора до метки. Раствор разливают в пробирки и стерилизуют при (121 ± 1) еС в течение 30
мин.
4.6.12.3 Реактивы для окраски по Граму готовят по ГОСТ ISO 7218.
Допускается использовать готовые растворы промышленного производства в соответствии с
рекомендациями изготовителя.
4.6.13 Среды сухие промышленного изготовления, указанные в 4.3, готовят согласно рекомен
дациям изготовителей, указанным на этикетках.
4.6.14 Требования безопасности
При выполнении измерений необходимо соблюдать требования безопасности при подготовке и
проведении анализа, требования безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ
12.1.007, пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.018. электробеэопасности по ГОСТ Р 12.1.019, а также
требования, изложенные в технических документах на применяемые средства измерений и вспомога
тельное оборудование. Микробиологические анализы проводят с соблюдением требований ГОСТ ISO
7218.
4.6.15 Требования к квалификации оператора
К выполнению измерений и обработке результатов допускается специалист, имеющий опыт ра
боты в микробиологической лаборатории, освоивший методы и прошедший инструктаж по технике
безопасности при работе с вредными веществами и пожарной безопасности.
5 Методы определения бифидогенных свойств
5.1 Метод определения бифидогенных свойств
in vitro
1
5.1.1 Сущность метода
Метод оценки
in vitro
1 бифидогенной активности функциональных пищевых продуктов основан
на выявлении чувствительности к воздействию функционального пищевого продукта тест-штаммов
микроорганизмов представителей популяций защитной микрофлоры кишечника человека родов
Lac
tobacillus spp.. Bifidobacterium spp.
и
Escherichia coti
с нормальной ферментативной активностью.
Тест-культуры
Lactobacillus spp.. Bifidobacterium spp.
и
E. coli
вносят в модельные субстраты, со
держащие функциональные пищевые продукты, или без них (контрольные пробы), методом предель
ных (исчерпывающих) концентраций, выдерживают при оптимальных условиях инкубации и затем
изучают морфологические, кинетические, функциональные и количественные параметры их роста.
Экспериментальную модель составляют из параллельных рядов пробирок с последовательны
ми десятикратными разведениями
Lactobacillus. Bifidobacterium
и
Е. coli
в соответствующих пита
тельных средах: среда МРС жидкая для
Lactobacillus spp.
тиогликолевая, гидролизатно-молочная
или кукурузно-лактозная среды для
Bifidobacterium spp
. среда Кесслер с лактозой для
Е. coli.
В
опытные ряды ииокулированных тест-штаммами питательных сред вносят анализируемый функцио
нальный пищевой продукт; контролем являются десятикратные разведения тест-микроорганизмов
без добавления функционального пищевого продукта (ингредиента).
Расчет концентрации функционального пищевого продукта (ингредиента),вносимого в мо
дельные среды, проводят таким образом, чтобы она обеспечивала соотношение «Суточная доза
функционального пищевого продукта/объем желудка взрослого человека», при этом за средний объ ем
желудка взрослого человека принимают величину 2250 см3.
11