ГОСТ Р 56201—2014
Пример расчета: Если суточная доза функционального пищевого продукта составля
ло
ет 50 г, его концентрация в модельной среде рассчитывается по формуле:—— и
22 БО
должна составлять 22,2 мг/см3. Для получения этой расчетной концентрации в пробирку с 9
см3модельной среды вносят 1 см3раствора (взвеси) функционального пищевого продук та
с концентрацией 222 мг/см3.
По результатам анализа устанавливают значения предельных разведений тест-культур, в кото
рых имеет место рост микроорганизмов, характерных для представителей соответствующих популя
ций кишечной микрофлоры, путем регистрации визуальных признаков типичных колоний в средах
культивирования и(или) при подтверждающем пересеве на элективные среды, а также наличия кле
ток типичной морфологии при микроскопии мазков-препаратов.
На основании полученных результатов делается вывод о наличии бифидогенного действия
функционального пищевого продукта (ингредиента) или об отсутствии бифидогенного действия в
модели
in vitro.
5.1.2 Проведение анализа
Анализ проводят по схеме:
Контроль, тест-культуры микроорганизмов -
Lactobacillus spp.. Bifidobacterium spp. и E. coli.
Ряды пробирок с последовательными десятикратными разведениями тест-культур:
1 ряд - тест-культура
Lactobacillus spp.
с 10 ’1разведения до 10 ’5разведения, без функцио
нального пищевого продукта (контроль);
2 ряд - тест-культура
Bifidobacterium spp.
с 10 ’1разведения до 10 15разведения, без функцио
нального пищевого продукта (контроль);
3 ряд - тест-культура
Е. coli
с 10 ’1разведения до 10 15 разведения, без функционального пи
щевого продукта (контроль);
4 ряд - тест-культура
Lactobacillus spp.
с 10
’
разведения до 1015 разведения и 1 см3раствора
функционального пищевого продукта расчетной концентрации;
5 ряд - тест-культура
Bifidobacterium spp.
с 10 -1разведения до 10’15разведения и 1 см3раство
ра функционального пищевого продукта расчетной концентрации;
6 ряд - тест-культура
Е. coli с
10 -1разведения до 10’16 разведения и 1 см3раствора функцио
нального пищевого продукта расчетной концентрации.
Инкубирование посевов тест-культуры
Е. coli
проводят при (37 ± 0.5) °С в течение 24 ч, тест-
культур
Lactobacillus spp.
и
Bifidobacterium spp.
- в течение 72 ч.
По окончании инкубирования посевов определяют предельные разведения, в которых обнару
живают рост тест-культур микроорганизмов, путем регистрации визуально характерных признаков
роста в среде культивирования и приподтверждающем пересеве на дифференциально-
диагностические среды, а также путем выявления клеток типичной морфологии при микроскопии маз
ков-препаратов (см. таблицу 1).
Т а б л и ц а 1 - Характер роста тест-культур микроорганизмов
Микроорганизмы
Питательная среда
Признаки роста в жидких средах и характеристика коло
ний на плотных/полужидких средах
Бактерии рода
Lactobacillus
Среда МРС жидкая
Помутнение среды, образование осадка, пристеноч
ный рост
Колонии мелкие, диаметром 1 -3 мм, гладкие или
Среда МРС агаризоеанная
нернистые. плоские или слетка выпуклые, бесцветные
ши слабо пигментированные
Бактерии рода
Bifidobacterium
Тиогликолевая среда
Кометы, гвоздики, шарики, иголочки различной дли
ныи конфигурации
Гидролизатно-молочная
среда или кукурузно-
лактозная
среда
Колонии от белого и серого до темно-коричневого
твета. в виде крупинок, гречишного зерна или дисков,
иногда комета- или гвоздикообразные
12