ГОСТ Р 56201—2014
а) 1 этап (модель «желудок»),
В три стерильные колбы, содержащие по 10 см5цитратно-фосфатного буферного раствора с
активной кислотностью (2,5 - 3.0) ед. pH. приготовленного по 4.6.2.4, вносят: тест-культуру микроор
ганизмов рода
Bifidobacterium
вколичестве 1x10й КОЕ/см3, тестируемый функциональный пищевой
продукт в концентрации, рассчитанной по 5.1.1, пепсин в количестве 0.5 мг/см3. Параллельно готовят
аналогичную смесь без функционального пищевого продукта (контроль, также в трех повторностях).
Для контроля концентрации жизнеспособных клеток тест-штамма из исходной суспензии суточной
культуры
Bifidobacterium
делают ряд десятикратных разведений и проводят посев в одну из сред, ука
занных в 4.6.3.2 для культивирования бактерий рода
Bifidobacterium.
Инкубирование модельных сред проводят с использованием термошейкера-инкубатора с часто
той колебаний 90 об/мин при температуре 37 °С в течение 1,5 ч. Для определения количества живых
клеток тест-культуры
Bifidobacterium
после инкубации в модели «желудок» делают высев из каждой
колбы в одну из сред, указанных в 4.6.3.2 для культивирования бактерий рода
Bifidobacterium.
б) 2 этап (модель «тонкая кишка»),
В три стерильные колбы, содержащие по 10 см3цитратно-фосфатного буферного раствора с
pH 7.5, приготовленного по 4.6.2.4. вносят: тестируемый функциональный пищевой продукт в концен
трации. рассчитанной по 5.1.1. ферментный препарат по 4.3 в количестве 25 мг/см3, 1 см3 инокулята
из колб после первого этапа инкубации со смесью, содержащей функциональный пищевой продукт
(опыт). Параллельно готовят аналогичную смесь без функционального пищевого продукта (контроль,
в трех повторностях), в которую добавляют по 1 см3инокулята из контрольных колб 1 этапа. Инкуби
рование модельных сред проводят с использованием термошейкера-инкубатора с частотой колебаний
90 об/мин при температуре 37 °С в течение 3 ч.
Допускается перед проведением 2-го этапа инкубации в модели «тонкой кишки» инокулят из
колб, имитирующих «желудок», нейтрализовать раствором гидроокиси натрия до 7.0 ед. pH и хранить
в течение ночи в холодильнике.
После инкубирования проб в модели «тонкой кишки» делают высев из каждой колбы в одну из
сред, указанных в 4.6.3.2 для культивирования бактерий рода
Bifidobacterium.
По окончании инкубации всех засеянных проб через (72 ± 1) ч проводят учет результатов, отме
чая наличие (отсутствие) признаков роста
Bifidobacterium spp
.в питательных средах, микроскопируют
мазки-препараты из всех проинкубированных посевов, измеряют активную кислотность жидких сред.
Количество живых клеток
Bifidobacterium spp
выражают в Ig КОЕ/см3.
По окончании инкубации тест-штамма в условиях «желудка» и «тонкой кишки» в опытных и
контрольных вариантах смесей оценивают степень выживаемости популяции
Bifidobacterium spp.
ко
торую рассчитывают по количеству жизнеспособных клеток и определяют как индекс выживаемости
ИВ по формуле:
ИВ =100,(1)
Я 1
где
К\
- число живых клеток тест-штамма до инкубации в модели «желудка» или «тонкой кишки»;
К2
- число живых клеток тест-штамма после инкубации в модели «желудка» или «тонкой киш
ки»;
100 - коэффициент, %.
5.2.3Определение воздействия функционального пищевого продукта на функциональ
ное состояние бактерий рода
Bifidobacterium
Воздействие функционального пищевого продукта в модели
in vitro
2 включает определение
функционального состояния популяций
Bifidobacterium spp.
по их способности к кислотообразованию в
средах культивирования, инокулироваииых тест-микроорганизмами до и после их выдерживания в
моделях, имитирующих процесс пищеварения.
Таблица 2 - Критерии кислотообразующейспособности
Bifidobacteriumspp.
Степень кислотообразующей
способности
Bifidobacterium spp.
Очень высокая
Высокая
Умеренная
Слабая
Очень слабая
Отсутствие
pH среды
культивирования, ед. pH
Менее 4.3
4.3-4.4
4.5-4.6
4.7—4.8
4.9-5.1
Более 5.1
14