ГОСТ Р 56201—2014
50 г неомицина (сульфата или основания) растворяют в 500.0 см3 дистиллированной воды.
Массовая концентрация неомицина в растворе 100 г/дм3.
2)В составе гидролизатио-молочной или кукурузно-лактозной среды массовую долю агара
увеличивают до 17 г в 1000 см1питательной среды. Среды разливают в широкие пробирки но (20.0 ±
0.5) см3и стерилизуют при температуре (112 ± 1) °С в течение 30 мин.
При проведении анализа в готовые среды перед расплавлением вносят раствор неомицина из
расчета 0,2 см3раствора на 20 см3среды.
в) Питательная среда МРС (MRS) с диклоксациллином
Среду готовят в три этапа:
1) Приготовление раствора селективного агента
Состав:
- диклоксациллии - 25 мг;
- дистиллированная вода - 50 см3.
Диклоксациллии растворяют вдистиллированной воде, затем полученный раствор стерилизуют
фильтрацией, срок хранения раствора - 15 сут при температуре 4 X .
П р и м е ч а н и е - Допускается готовить раствор диклоксациллина без фильтрации: диклоксациллии в
асептических условиях растворяют в стерильной дистиллированной воде.
Непосредственно перед использованием готовят рабочее разведение этого раствора 1:10.
2) Приготовление антиоксидантного раствора
Состав:
- L-цистеина гидрохлорид - 3 г;
- дистиллированная вода - 100 см3.
L-цистеина гидрохлорид растворяют в дистиллированной воде и стерилизуют фильтрацией.
Раствор разливают по 10 см3в стерильные пробирки. Хранят раствор 15 сут при температуре 4 °С.
П р и м е ч а н и е - Допускается готовить раствор хлористого цистеина без фильтрации: в асептических
условиях растворяют хлористый цистеин в стерильной дистиллированной воде.
3) Приготовление питательной среды МРС (MRS)
Готовую среду МРС (MRS) расплавляют и выдерживают в кипящей водяной бане в течение 20
мин для регенерации. Затем среду охлаждают до 40 X - 45 X и вносят растворы селективного аген
та в количестве 1 см3 на 100 см3 среды и антиоксиданта - 1 см3 на 100 см3 среды. Смесь аккуратно
перемешивают, не допуская насыщения среды воздухом.
4.6.4 Приготовление питательной среды (кровяного агара) для культивирования бакте
рий рода
Streptococcus’
К растопленному и охлажденному до 45 °С - 50 X питательному агару с 1 % глюкозы добавля
ют 3-5 % по объему дефибринированной крови животных. Разливают в чашки Петри диаметром 90
мм по ГОСТ 23932 по 20 см3среды и подсушивают при температуре 37 °С.
Допускается для культивирования бактерий рода
Streptococcus
применение трипказо-соевого
агара с 5 % бараньей крови промышленного изготовления.
4.6.5 Приготовление питательных сред для культивирования бактерий рода
Bacteroides
4.6.5.1 Неомицин-arap для бактероидов
К 1 дм3дистиллированной воды добавляют до Юг пептона. 3.0 г хлористого натрия. 2.0 г гидро
фосфата натрия. 3.0 г сухого мясо-пептонного бульона. 4.0 г дрожжевого экстракта. 6.0 г декстрозы.
1.0 см3твин-80, 20.0 г агара, устанавливают pH среды (7.2 ± 0.1) ед. pH. стерилизуют при 112 X в
течение 30 мин. Перед разливом в чашки к рсновному агару добавляют: 250 мг цистина. 80 мг не
омицина. 200 мг дезоксихолата натрия. 30 см1дефибринированной бараньей или лошадиной крови.
4.6.5.2 Желчно-эскулиновый агар для бактероидов (ВВЕ) для селективного выделения, иден
тификации и культивирования микроорганизмов группы
Bacteroides fragilis
Основу среды готовят в соответствии с указаниями изготовителя на этикетке, остужают до 45
X - 50 X . асептично добавляют регидратированное содержимое флакона с селективной добавкой
(содержимое флакона - 50 мг гентамицина, достаточно для приготовления 500 см3готовой среды).
4.6.6 Приготовление питательных сред для культивирования бактерий семейства
Entero-
bacteriaceae
. в том число
Е. соП
и рода
Proteus
4.6.6.1 Среда Эндо
’ При добавлении 6 % -10 % крови среда может использоваться для определения общего числа аэробных
и анаэробных микроорганизмов.
9