ГОСТ Р 56201—2014
1г сорбиновой кислоты переносят, смывая раствором гидроокиси натрия (NaOH) с молярной
концентрацией 1 моль/дм3. в мерную посуду вместимостью 100 см3, объем доводят до метки тем же
раствором. Полученный раствор стерилизуют методом мембранной фильтрации по ГОСТ 26670 при
использовании мембранных фильтров с размером пор 0.2 мкм.
Допускается готовить раствор сорбиновой кислоты без фильтрации с соблюдением правил
асептики, при этом используют раствор гидроокиси натрия, приготовленный в асептических условиях
растворением NaOH в стерильной дистиллированной воде.
4.6.3.2 Приготовление питательных сред для культивирования бактерий рода
Bifidobacterium
а) Печеночно-цистеиновая среда Блаурокка
0.5 кг свежей говяжьей печени очищают от пленок и желчных протоков, измельчают, заливают
1000 см3 дистиллированной воды и кипятят в течение 1,5-2 ч. Отвар фильтруют, доводят до 1000
смДистиллированной водой. К полученному печеночному бульону добавляют 5.0 г натрия хлорида
и 10,0 г пептона мясного ферментативного, устанавливают активную кислотность (8.15 ± 0.50) ед. pH
с помощью 10 %-ного раствора NaOH и кипятят 10 мин. Полученную основу среды стерилизуют
при (121 ± 1) X в течение 15 мин. На следующий день основу среды декантируют, доводят
дистиллиро ванной водой до 1000 см3, добавляют 5.0 г глюкозы. 0.8 г агар-агара. 0.3 г цистеина.
Смесь кипятят 10 мин, устанавливают pH на уровне (7.7 ± 0,1) ед. pH. затем среду разливают в
пробирки по 10 см3и стерилизуют при температуре (121 ± 1) °С в течение 15 мин.
Среду Блаурокка проверяют на стерильность путем выдержки при температуре (37 ± 1) °С в
течение двух суток. Хранят готовую среду не более 1 мес при температуре (20 ♦ 2) ’С и не более 2 мес
при температуре (4 ± 2) °С. Ростовые качества каждой серии среды Блаурокка контролируют вы севом
контрольной тест-культуры
Bifidobacterium spp.
б) Тиогликолевая среда
В 1000 см3дистиллированной воды вносят 15.0 г гидролизата казеина ферментативного сухо
го. 5.0 г дрожжевого экстракта, 2.5 г хлорида натрия. 0.75 г агара микробиологического, размешивают
и нагревают до температуры 60 °С - 70 °С. L-цистин предварительно растворяют при постепенном
добавлении 10 %-ного раствора ИаОНдо полного растворения. Раствор цистина вносят в
приготов ленную смесь, устанавливают pH 8.0-8.2 с помощью 10 %-ного раствора NaOH, кипятят в
течение 2-3 мин до полного расплавления агара. Добавляют 5.0 г глюкозы и 0.3 см3 тиогликолевой
кислоты (или 0.5 г натрия тиогликолята), фильтруют через фильтровальную бумагу, устанавливают
pH 7.2-7,3 с помощью 5 %-ного раствора соляной кислоты.
Среду разливают в стерильные пробирки и стерилизуют автоклавированием при температуре
(121 ± 1) "С в течение 15 мин. Готовую среду хранят в защищенном от света месте при температуре
18 °С - 25 °С.
в) Гидролизатно-молочная среда
Гцаролизованное молоко готовят по ГОСТ 10444.11.
Для приготовления 1000 см3 среды 150 см3гидролизованного молока, разводят дистиллиро
ванной водой в соотношении 1:1, добавляют 2.5 г агара и нагревают до полного растворения агара. В
700 см3дистиллированной воды вносят 20 г пептона ферментативного. 3.5 г хлорида натрия, 10 г
лактозы и 0,5 г аскорбиновой кислоты; смесь нагревают до температуры (80 ± 2) °С, после чего со
единяют с расплавленным агаром. В смеси устанавливают pH (7,4 ± 0,1) ед. pH. кипятят в течение (15
± 1) мин. дают отстояться, сливают с осадка, не фильтруя.
Среду разливают в пробирки по 10,0 см3и стерилизуют при температуре (112 ± 1) °С в течение
30 мин.
г) Кукурузно-лактозная среда
Для приготовления 1000 см3 среды в 100 см3дистиллированной воды вносят 2,5 г агара и на
гревают до полного растворения агара. К 800 см3дистиллированной воды добавляют 10 г пептона. 10 г
лактозы, 40,0 см3 водного раствора кукурузного экстракта, разбавленного в соотношении 1:6, 6 г ли
моннокислого трехзамещенного натрия. 0.12 г сернокислого магния, 2 г фосфорнокислого двузаме-
щенного калия. 0.5 г аскорбиновой кислоты, раствор нагревают до температуры (80 ± 2) °С, после че го
соединяют с расплавленным агаром. Полученную смесь доводят до объема 1000 см3горячей дис
тиллированной водой и устанавливают pH среды (7,0 ± 0,1) ед. pH с помощью 10 %-ного раствора
NaOH. Среду разливают в пробирки по 10.0 см’ и стерилизуют при температуре (112 ± 1) X в тече ние
30 мин. Готовую среду хранят не более 1 мес при температуре (4 ± 2) °С.
4.6.3.3 Приготовление селективных сред для культивирования бактерий рода
Bifidobactohum
а) TOS-MUP агар (TOS пропионатный агар с мулироцином лития) готовят по ГОСТ ISO 29981.
б) Среды с неомицином
Среды готовят в два этапа:
1) приготовление раствора неомицина
8