ГОСТ Р 56201—2014
вают на поверхность питательной среды, предназначенной для культивирования бактероидов. После
инкубации в течение 48 ч выросшие колонии микроскопируют и подсчитывают. Колонии
Bacteroides
spp.-
плоские голубоватого цвета с матовой поверхностью, с ровными или зазубренными краями, как
правило, колонии мелкие.
5.3.2.4 Обработка результатов количественного микробиологического посева
Учет и обработку результатов проводят по истечении сроков инкубации по числу выросших ко
лоний в посевах из двух последних разведений, с изучением культуральных, тинкториальных (окраска по
Граму) и морфологических (микроскопия) свойств. Подсчет проводится на чашках с числом вы росших
колоний от 5 до 30. с расчетом среднего арифметического показателя.
Количество микроорганизмов определяемых групп, родов, видов К, КОЕ в 1 г фекалий, вычис
ляют по формуле:
К = число выросших колоний на чашке 20
п,
(2)
где
п
- разведение суспензии фекалий;
20 - коэффициент пересчета на 1 см3суспензии фекалий при посеве 0.05 см3(0.05 см3состав
ляет 1/20 см3).
Например, в посеве из разведения 10 выросло 10 колоний. 10 умножают на 20 и умно
жают на 107 (разведение) и получают 2,0
*
109КОЕ/г.
Полученные результаты содержания микроорганизмов (плотность популяций) переводят в деся
тичные логарифмы числа колониеобразующих единиц на 1 г фекалий (содержимого слепой кишки) (lg
КОЕ/г).
5.3.2.5 Определение факторов патогенности у транзиторных популяций кишечной микрофлоры
Помимо количественных характеристик у анализируемых транзиторных популяций определяют
наличие факторов патогенности, а при необходимости проводят идентификацию родовой и видовой
принадлежности, для чего выросшие культуры подвергают дальнейшему анализу.
У
Staphylococcus spp.
определяют наличие лецитиназной и плазмокоагулирующей активности. У
бактерий рода
Proteus
выявляют способность к роению и росту на средах, используемых для учета
бактерий семейства
Enterobacteriaceae.
У дрожжеподобных грибов определяют характер филаментации, наличие псевдомицелия и
способность к образованию хламидоспор на рисовом агаре.
У бактерий семейства
Enterobacteriaceae. Staphylococcus spp.. Enterococcus spp.. Streptococcus
spp.
изучают гемолитические свойства на кровяном агаре.
У штаммов бактерий семейства
Enterobacteriaceae
при необходимости проводят определение
таксономической принадлежности с использованием систем (мультимикротестов) для биохимической
идентификации энтеробактерий или посевом на диагностические среды для определения способно сти
к ферментации углеводов (среды Гисса. трехсахарный агар) и аминокислот (фенилаланин-агар, среды
с лизином, орнитином. аргинином).
Морфологию выделенных культур определяют микроскопированием окрашенных по Граму маз
ков-препаратов.
5.3.3 Определение характеристик защитных популяций микрофлоры
5.3.3.1 Определение функциональной активности бактерий рода
Bifidobacterium,
выделенных
из фекалий (содержимого слепой кишки) крыс
Функциональную активность популяции
Bifidobacterium spp.,
выделенной из фекалий (содержи
мого слепой кишки) крыс, устанавливают по способности закислять среду культивирования путем
измерения активной кислотности (pH) в средах культивирования I генерации (непосредственно в про
бирках с тиогликолевой средой или средой Блаурокка) на 5 сутки выращивания. Величину pH
изме ряют потенциометрическим методом во всех пробирках с наличием признаков роста. Контролем
слу жит пробирка с исходной питательной средой. Полученные значения по всем засеянным
разведениям продукта, в которых проводилось измерения, суммируют и усредняют, после чего
итоговое значение сопоставляют с критериями кислотообразующей способности (степенями
кислотообразования) бак терий рода
Bifidobacterium
в соответствии с таблицей 2 (см. 5.2.3).
5.3.3.2 Определение дополнительных характеристик выделенных представителей защитной
микрофлоры
Для оценки влияния функциональных пищевых продуктов на представителей основных попу
ляций защитной микрофлоры кишечника выделенные культуры подвергают расширенной идентифи
кации и определению антагонистической активности по тестам, указанным в таблице 4.
17