ГОСТ E N 12821-2014
Упаривают отобранную методом полупре пар ативной хроматографии
фракцию досуха и остаток растворяют в растворителе, совместимом с по
движной фазой для аналитической хроматографии.
Инжектируюталиквотуполученногораствораваналитическую
ВЭЖХ-систему и идентифицируют пики витаминов D? и D3 (6.6.3). Необхо
димо, чтобы было достигнуто отделение пиков витаминов D? и D3 от пиков
мешающих матричных компонентов
Типичная аналитическая хроматограмма приведена в приложении С.
6.6.3 Идентификация
Пики витаминов D: и D3на хроматограмме раствора пробы идентифи
цируют по совпадению значений времени удерживания со значениями вре
мени удерживания пиков витаминов D2и D3на хроматограммах стандартных
растворов при одинаковых хроматографических условиях (6.5). Использова
ние диодноматричного детектора позволяет детально рассмотреть спектр пи
ка витамина D в ультрафиолетовой области и оценить чистоту пика. Повтор
ная регистрация хроматограммы пробы с использованием различных длин
волн детектирования может быть также использована для оценки чистоты
пика и подтверждения его идентификации
6.6.4 Число определений
Следует провести по меньшей мере два независимых определения
6.7Расчет градуировочного коэффициента по методу внутреннего
стандарта
Рассчитывают градуировочный коэффициент (R/) для витамина D3 при
применении в качестве внутреннего стандарта витамина D: по формуле (3),
используя стандартные растворы известной концентрации (4 13):
АтР;-
Rf -
ЛТО; ’ РУП>3
(3)
где Атоз - площадь или высота пика витамина D3в стандартном растворе,
4
^
std
2- площадь или высота пика витамина D2в стандартном растворе;
P5TD2 ” массовая концентрация витамина D2 в стандартном растворе,
13