ГОСТ EN 12821-2014
Подбор условий элюирования в полупрепаративной ВЭЖХ-системе
(5.6.1)
проводят путем анализа в этой системе стандартного раствора смеси
витаминов
D
t и
D
3
для полупрепаративной хроматографии
(4.14),
добиваясь
при этом элюирования витамина D одним пиком со стабильным временем
удерживания при повторных вводах. Соблюдение этого условия необходимо
для обеспечения возможности точного отбора фракции элюата, содержащей
витамин D, при очистке экстракта пробы.
Условия для полупрепаративной ВЭЖХ должны быть подобраны та
ким образом, чтобы достигалось оптимальное отделение витамина D от то
коферолов и других мешающих компонентов матрицы пробы. Примеры хро
матограмм см в приложении С.
Подбор условий хроматографического разделения в аналитической
ВЭЖХ-системе проводят путем анализа в этой системе стандартного раство
ра смеси витаминов D: и D3для аналитической хроматографии (4.15), доби
ваясь при этом 98 %-ного разделения пиков витаминов D> и D3(те. коэффи
циент разрешения пиков должен быть более 1,0), а также отделение их пиков от
всех мешающих компонентов матрицы пробы
6.6 Анализ пробы
6.6.1 Полупрепаративная ВЭЖХ
Инжектируют аликвотную часть сконцентрированного экстракта про
бы в полу препаративную ВЭЖХ-систему (5.6 1) и собирают фракцию, со
держащую витамин D Временное окно сбора фракции должно быть
предва рительно установлено с использованием смешанного стандартного
раствора смеси витаминовD: и D3для полупрепаративной хроматографии D
(6.5). Ок но должно быть достаточно широким для полного сбора витамина
D, но в то же время достаточно узким для исключения попадания
токоферолов или дру гих мешающих соединений
Типичная полу пре пар ативная хроматограмма приведена в приложении
С.
6.6.2 Аналитическая ВЭЖХ
12