ГОСТ ISO/TS 11133-1—2014
4.3.8 Подготовка добавок
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ - С готовыми добавками, содержащими токсичные вещест
ва. особенно антибиотики, необходимо обращаться с осторожностью, избегая рассеивания
порошка, что может вызвать аллергические или другие реакции у лабораторного
персонала. Необходимо соблюдать технику безопасности и следовать инструкциям
изготовителя при приготовлении растворов.
Нельзя использовать просроченные добавки, поскольку, например, для рабочих растворов ан
тибиотиков срок годности истекает обычно в тот же самый день. При определенных обстоятельствах
растворы антибиотиков можно хранить в замороженном состоянии подходящими объемами (аликво
тами), но не допускается вторичное замораживание после оттаивания. Пользователю рекомендуется
обсудить с изготовителем потенциальную потерю активности в результате замораживания или опре
делить ее самостоятельно.
4.4 Подготовка к применению
4.4.1 Плавление агаризованных питательных сред
Расплавляют питательную среду, поместив ее на кипящую водяную баню, или с помощью любо
го другого процесса, который дает аналогичные результаты (например, в автоклаве текучим паром).
Среды, которые ранее прошли обработку в автоклаве, рекомендуется снова нагревать в течение ми
нимального времени, чтобы поддержать качество среды. Необходимо избегать перегрева и прекра
тить нагревание, если среда уже расплавилась. Выдерживают при комнатной температуре в течение
короткого периода времени, например 2 мин, во избежание растрескивания стекла.
Охлаждают расплавленную среду до температуры от 47 °С до 50 JC на водяной бане с контро
лем температуры. Время, необходимое для достижения температуры от 47 JC до 50 °С. зависит от
типа среды, объема и количества сосудов в водяной бане. Расплавленную среду рекомендуется ис
пользовать по возможности сразу, оставляя в таком состоянии не более чем на 4 ч. Неиспользован
ную среду не следует подвергать вторичному затвердеванию для последующего использования. В
случае особо чувствительных сред время выдержки расплавленных сред необходимо сократить, как
это установлено в соответствующем стандарте.
Устанавливают и документируют режим нагрева агара путем установки термометра в а в и з о
ванную среду в отдельном контейнере, аналогичном тому, который используется для испытуемой
среды.
Среды, которые добавляют к пробе, следует нагреть до температуры от 44 °С до 47 СС, или как
это установлено в соответствующем стандарте.
4.4.2 Деаэрация питательных сред
Если необходимо, непосредственно перед применением нагревают питательную среду на ки
пящей водяной бане или текучим паром в течение 15 мин. приоткрыв крышку или колпачок; после на
гревания плотно закрывают крышки и быстро охлаждают до необходимой температуры.
4.4.3 Введение дополнительных ингредиентов
Не устойчивые к нагреванию ингредиенты рекомендуется добавлять в среду после ее охлажде
ния до температуры от 47 °С до 50 °С. Стерильному ингредиенту дают достичь комнатной температу ры
перед добавлением его в плотную среду. Холодные жидкости могут вызвать желатинизацию агара или
образование прозрачных хлопьев. Все добавленные в среду ингредиенты вмешивают в среду
осторожно и тщательно, затем распределяют по конечным контейнерам по возможности максимально
быстро.
4.4.4 Подготовка и хранение сред в чашках Петри
Разливают расплавленную плотную питательную среду по чашкам Петри, так. чтобы получить
слой толщиной не менее 3 мм (например, для чашек диаметром 90 мм обычно требуется от 18 до 20
см3агара), или как это установлено в соответствующем стандарте. Дают агару охладиться и застыть,
разместив чашки Петри, закрытые крышками, на холодной горизонтальной поверхности. Если инку
бирование длится более чем 48 ч или при температуре выше 40 °С. или если чашки Петри использу
ются для посева после хранения, требуется большее количество питательной среды.
П р и м е ч а н и е - Во время инкубирования может произойти потеря влаги плотной средой, что может
неблагоприятно сказаться на росте микроорганизмов при некоторых обстоятельствах. Факторы, влияющие на
потерю воды, включают состав среды, количество среды в чашках, тип термостата, т. е. с вентиляцией или без нее,
влажность атмосферы в термостате, расположение и количество чашек в термостате и температура инку
бирования.
Застывшую среду используют незамедлительно или хранят в условиях, предотвращающих из
менение ее состава, т. е. в темноте и/или в холодильнике при температуре (5
±
3) °С в герметично
закрытых пакетах (см. 4.2). Чашки снабжают этикеткой, на которой указана дата приготовления и/или
7