ГОСТ ISO/TS 11133-1—2014
Микробное загрязнение не должно превышать 103на кубический сантиметр и должно по воз
можности быть ниже 102на кубический сантиметр. Следует проводить регулярную проверку микроб
ного загрязнения в соответствии с ИСО 6222 [1] [проводя инкубирование при 22 °С в течение (68
±
4) ч]
или эквивалентным утвержденным методом.
4.3.3 Взвешивание и растворение
Тщательно взвешивают соответствующее количество обезвоженной среды (следя за тем. чтобы
не вдохнуть порошок, особенно, если среда содержит токсичные вещества) и постепенно добавляют
требуемое количество воды, избегая образования комков.
4.3.4 Растворение и диспергирование
Если необходимо, для растворения обезвоженные среды требуется быстро диспергировать пу
тем постоянного перемешивания с последующим нагреванием. Средам, содержащим агар, перед на
греванием с перемешиванием для растворения необходимо дать несколько минут на пропитывание.
4.3.5 Измерение и регулирование pH
pH измеряют с помощью pH-метра и регулируют перед стерилизацией, если необходимо, так.
чтобы после стерилизации и охлаждения до температуры 25 JC среда имела требуемое значение pH
±
0,2 единицы pH. если нет иных указаний. Регулировку pH обычно осуществляют с помощью раство ра
гидроксида натрия (NaOH) концентрацией приблизительно 40 г/дм1 (примерно 1 моль/дм3) или
разбавленной соляной кислоты (HCI) концентрацией приблизительно36.5 г/дм3 (примерно 1
моль/дм3). При регулировании pH среды после стерилизации используют стерильные растворы.
П р и м е ч а н и е - Имеющиеся в продаже среды могут демонстрировать значительные изменения pH
до и после обработки в автоклаве. Однако при условии использования дистиллированной или деионизованной
воды регулирование pH перед обработкой в автоклаве не потребуется.
4.3.6 Разливка
Среду разливают по соответствующим контейнерам, имеющим вместимость, по меньшей мере,
на 20 % превосходящий объем среды.
4.3.7 Стерилизация
4.3.7.1 Общие положения
Стерилизацию питательных сред и реактивов можно выполнять влажным паром (4.3.7.2) или
фильтрацией (4.3.7.3).
Определенным средам для стерилизации не требуется обработка в автоклаве, их можно
использовать после кипячения. Например, среды для выращивания
Entorobactoriaceae,
содержащие
бриллиантовый зеленый, отчасти чувствительны к нагреванию и действию света, и после кипения их
необходимо быстро охладить и защищать от интенсивного света. Некоторые реактивы также могут
использоваться без стерилизации (см. соответствующий стандарт или инструкции изготовителя).
4.3.7.2 Стерилизация влажным паром
См. ISO 7218.
Стерилизацию влажным паром выполняют в автоклаве или специальном аппарате для приго
товления питательных сред. Обычно операция обработки в автоклаве занимает 15 мин при темпера
туре (121
±
3)°С. Для объемов свыше 1000 см3 режим стерилизации адаптируют соответствующим
образом. В любом случае необходимо следовать рекомендациям стандарта или инструкциям
изготовителя.
П р и м е ч а н и е - Если в автоклаве обрабатывают большие объемы сред (> 1000 см), может произойти
перегрев. См. ISO 7218.
После нагревания необходимо дать средам остыть, таким образом, чтобы предотвратить выкипа
ние. Это особенно важно для сред в большом объеме и для чувствительных сред, например, сред, со
держащих бриллиантовый зеленый.
4.3.7.3 Стерилизация фильтрацией
Стерилизацию фильтрацией можно выполнить под вакуумом или под давлением. Используют
стерильное оборудование и мембраны с диаметром пор 0,2 мкм. Стерилизуют различные части
фильтровального оборудования в соответствии с ISO 7218 либо используют заранее стерилизован
ное оборудование.
На некоторых фильтровальных мембранах могут задержаться протеины или другие вещества
(такие как антибиотики). Для получения требуемой концентрации пользователь должен использовать
предварительно смоченный фильтр.
4.3.7.4 Контроль
После обработки в автоклаве, кипячения или фильтрования любую среду необходимо контро
лировать, в частности, в отношении значения pH. цвета, стерильности и консистенции.
6