ГОСТ 32429-2013
в емкости аналогичные реальному тесту. Рыб необходимо хорошо кормить в течение периода
акклиматизации и экспозиции. Период экспозиции начинают с отбора взрослых сексуально
диморфных особей из лабораторной поставки половозрелых животных (например, с выраженными
вторичными половыми признаками, заметными у тупоголового гольяна и медаки), пригодными для
разведения. Для ориентира (эти критерии не могут рассматриваться изолировано от фактически
наблюдаемого репродуктивного статуса конкретных рыб), тупоголовый гольян должен быть
приблизительно (20 ± 2) недельного возраста, при условии, что рыбки выращивались при
температуре (25 ± 2) “С в течение всей продолжительности жизни. Японская медака должна быть в
возрасте приблизительно (16 ± 2) недель, содержащаяся при (25±2)вС в течение всей жизни. Данио
рерио должны быть приблизительно в возрасте (16 ± 2) недель при культивировании при (26± 2) еС.
6.6 Концепция теста
6.6.1 Три концентрации тестируемого вещества, один контроль (вода) и. если необходимо, один
контроль с используемым растворителем. Данные могут быть объектом статистического анализа,
позволяющего определить статистически значимые различия между результатами контроля и
эксперимента. Статистическая обработка полезна для установления других возможных долгосрочных
негативных эффектов (например, выживание, развитие, рост и воспроизводство) вещества.
6.6.2 Для данио и медаки на 21 день эксперимента в экспериментальных группах каждой
тестируемой концентрации (пять самцов и пять самок в каждой из двух повторностей) и в
контроле(ях) берут пробы на виллогенин, и вторичные половые признаки, где это применимо. Для
тупоголового гольяна на 21 день экспозиции самцов и самок (два самца и четыре самки в каждой из
четырех репликаций), и в контроле(ях) берут пробы для измерения вителлогенина. и проверки
вторичных половых признаков.
6.6.3 Выбор тестовых концентраций
6.6.3.1 Для этого теста самой высокой тестируемой концентрацией должна быть максимально
допускаемая концентрация (МДК). установленная в ходе предварительного эксперимента или других
данных токсичности, или ее принимают равной 10 мг/л. или определяют, исходя из максимальной
растворимости в воде, выбирая самую низкую концентрацию. МДК определяют как самую высокую
тестовую концентрацию вещества, которая приводит к менее, чем 10 % смертности. Использование
этого подхода предполагает, что существуют эмпирические данные по острой или другой
токсичности, по которым может быть оценена МДК. Оценка МДК может быть неточной и обычно
требует некоторого обсуждения.
6.6.3.2 Требуются три тестовые концентрации с постоянным фактором, не превышающим 10. и
контроль без вещества (в случае необходимости, и кроме того контроль с растворителем).
Рекомендуется диапазон факторов разбавления между 3,2 и 10.
7 Процедура
7.1 Выбор и взвешивание экспериментальных рыб
Важно минимизировать разброс в весе рыбы в начале теста. Соответствующий диапазон
размеров различных видов, рекомендуемых для теста, приведен в приложении А. Для всей партии
рыб используемых в тесте, диапазон весов отдельно для самцов и самок должен находиться по
возможности в пределах 20 % от среднеарифметического веса рыбы одного и того же пола.
Рекомендуется взвесить подвыборки в партии рыб для оценки среднего веса перед началом
эксперимента.
7.2 Условия экспонирования
7.2.1 Продолжительность
Продолжительность теста -21день после периодапредварительной экспозиции.
Рекомендуемый период предварительной экспозиции-одна неделя.
7.2.2 Кормление
7.2.2.1 Рыб необходимо кормить соответствующим кормом в объемах достаточных для
поддержания физической формы. Необходимо соблюдать осторожность, чтобы избежать роста
микроорганизмов и помутнения воды. Рекомендуется ежедневную порцию разделить на две или три
равных части для многократного кормления в сутки, разделяя каждое кормление, по крайней мере,
трехчасовым промежутком. Корм можно давать одной большой порцией во время выходных дней.
Кормление необходимо прекратить за 12 часов до начала выборки/вскрытия животных.
7.2.2.2 Пища рыбы должна быть проверена на наличие загрязняющих примесей, таких как
хлорорганическиепестициды.полициклическиеароматическиеуглеводороды(ПАУ),
полихлорированные бифенилы (ПХБ). Корм с высоким уровнем фитоэстрогенов, который может
поставить под угрозу точность анализа, как известные антагонисты эстрогена (например. 17|3
эстрадиол) недопустим.
4