ГОСТ 32429-2013
Приложение G
(Справочное)
Оценка вторичных половых признаков у медаки для обнаружения определенных
веществ, воздействующих на эндокринную систему
Папиллярные бугорки’ являются вторичными половыми признаками медаки (Oryzias latipos).
* Папиллярные бугорки обычно появляются только у взрослых самцов и расположены между
вторым и седьмым или восьмым лучами анального плавника (рисунок G.1 и G.2). Очень редко они
могут появляться на первом луче плавника. Стандартная процедура (СП) позволяет измерять бугорки
на первом луче плавника (число лучей считается в этой СП от хвоста):
G.1После иссечения печени (приложение Е) тушку помещают в коническую тубу,
содержащую приблизительно 10 мл 10 %-ного нейтрального буферизованного водного раствора
формальдегида (верх головы, низ хвоста). Если гонада фиксирована в другом растворе кроме 10 %-
ного нейтрального буферизованного водного раствора формальдегида, сделайте с помощью бритвы
поперечный разрез через тушку между областью анального ребра и задним проходом, стараясь не
задеть гонопоры и гонады (рисунок G.3). Разместите головную часть тела рыбы в фиксирующем
растворе для сохранения гонады, и хвостовую часть тела рыбы в 10 %-ном нейтральном
буферизованном водном растворе формальдегида как описано выше.
G.2 После размещения тела рыбы в 10 %-ном нейтральном буферизованном водном
растворе формальдегида, ухватите область позади анального плавника пинцетом и согните ее
приблизительно на 30 секунд, чтобы открыть анальный плавник. Взяв анальный плавник пинцетом,
осторожно ухватите несколько лучей плавника, чтобы не повредить папиллярные бугорки.
G.3 Подержав анальный плавник открытым приблизительно 30 секунд, сохраните тело рыбы в
10 %-ном буферизованном растворе формальдегида при комнатной температуре до измерения
папиллярных бугорков (измерение должно быть проведено по истечении 24 часов).
Измерение:
1) После фиксации тела рыбы в 10%-ном растворе формальдегида в течение 24 часов,
выньте тушку рыбы из конической тубы и удалите формальдегид на фильтровальной бумаге (или
бумажном полотенце).
2) Поместите рыбу на брюшко. Затем аккуратно удалите анальный плавник, используя малые
ножницы рассечения (предпочтительно удаляйте анальный плавник с небольшим количеством
эндоскелета).
3) Ухватите заднюю часть отделенного анального плавника пинцетом и поместите его на
стеклянную пластину с несколькими каплями воды. Затем покрыть анальное ребро покровным
стеклом, стараясь не рассечь папиллярные бугорки во время захватывания анального плавника
пинцетом.
4) Подсчитайте количество слившихся папиллярных бугорков, используя счетчик для
биологическогомикроскопа(микроскоппрямогосветаилиинвертированныймикроскоп).
Папиллярные бугорки учитываются, когда формации бугорков заметны на задней части пластинки.
Зарегистрируйте в рабочем журнале количество слившихся папиллярных бугорков в каждом луче
плавника (например, первый луч - 0, второй луч - 10. третий луч - 12, и т.д.). и затем рассчитайте
сумму с помощью таблицы Excel для каждой индивидуальной рыбки. В случае необходимости,
сделайте фотографию анального плавника и подсчитайте число слившихся папиллярных бугорков на
фотографии.
5) После измерения, поместите анальный плавник в коническую тубу, описанную в (1) для
хранения.
17