ГОСТ 32429-2013
7.2.2.3 Несъеденная пища и фекалии должны удаляться из тестовых емкостей, по крайней
мере, два раза в неделю, например, с помощью тщательной очистки дна с помощью сифона.
7.2.3 Свет и температура
Фотопериод и температура воды должны соответствовать требованиям содержания видов.
7.3 Частота аналитических измерений
7.3.1 До начала периода экспозиции должна быть проверена система внесения вещества. Все
необходимые аналитические методы должны быть проведены, включая информацию о стабильности
вещества, в тестируемой среде. Во время теста концентрацию тестируемого вещества определяют
через равные промежутки по следующим параметрам: объемные скорости потока растворителя и
основного раствора изучаемого вещества. Измерения осуществляют по возможности ежедневно, но
реже чем два раза в неделю, они не должны изменяться более, чем на 10 % в течение теста.
Рекомендуется измерить фактические концентрации вещества всех сосудах в начале теста и в
еженедельных интервалах после этого.
7.3.2 Рекомендуется обосновывать результаты на измеренных концентрациях. Если
концентрация тестового вещества в растворе была удовлетворительно поддержана в пределах ±20 %
от номинальной концентрации в течение всего теста, то результаты могут быть привязаны или к
номинальной концентрации, или к измеренным значениям.
7.3.3 При необходимости образцы должны быть отфильтрованы (например, с помощью
фильтра с размерами пор 0.45 мкм) или отцентрифугированы. Центрифугирование является
предпочтительным. Если тестируемое вещество не адсорбирует на фильтры, фильтрация
приемлема.
7.3.4 Во время теста растворенный кислород, температура и pH среды должны измеряться во
всех тестовых сосудах, по крайней мере, раз в неделю. Общая жесткость и щелочность должны
измеряться в одном сосуде с самой высокой концентрацией раз в неделю. Температура должна
проверяться непрерывно, по крайней мере, в одном тестовом сосуде.
7.4 Наблюдения
Ряд общих биологических реакций (выживание, например) и целевых тестов (уровни
вителлогенина. например), оцениваются в ходе или по окончании теста. Количественный контроль
плодовитости можно, при необходимости, проводить ежедневно. Измерения и оценки этих
биомаркеров, и их полезность, описываются далее в данном руководстве.
7.4.1 Выживаемость
Рыбки должны обследоваться ежедневно во время тестового периода и смертность в этот
период должна регистрироваться. Мертвые рыбки должны удаляться как можно скорее. Заменять
мертвых рыбок в контроле или в тестовых сосудах нельзя. Пол рыб. которые гибнут во время теста,
должен быть определен макроскопической оценкой гонад.
7.4.2 Поведение и внешний вид
7.4.2.1Любое отклонение в поведении (относительно контроля) должно быть отмечено: это
может быть проявлением общей токсичности, включая гипервентиляцию, нескоординированное
плавание, потерю равновесия, неподвижность или атипичное кормление. Следует также отмечать
любые внешние аномалии (например, кровотечение, изменение цвета). Следует проявлять
осторожность при интерпретации этих признаков токсичности, так как они не являются надежными
свидетельствами биомаркеров о потенциальном воздействии на эндокринную систему. Эти
наблюдения могут также предоставить качественную информацию полезную для планирования
будущих экспериментов на рыбках. Например, территориальную агрессивность самцов или
маскулинизацию самок у толстоголового гольяна под воздействием андрогенов. Характерное
поведение данио выметывать икру с первыми лучами солнца может меняться под воздействием
эстрогенов или антиандрогенов.
7А.2.2 Наблюдения за качественными изменениями в поведении рыбок важны так же и при
отборе экспериментальных животных. Некоторые активные для эндокринной системы вещества могут
немедленно повлиять на следующие особенности поведения тупоголового гольяна: окраска
(осветление или потемнение), равномерность окраски (наличие вертикальных полос) и форма тела (в
районе головы и груди). Поэтому наблюдения за физическим появлением рыбы должны проводиться в
течение всего теста вплоть до его завершения.
7.4.3 Эвтаназия рыбы
На 21 день, то есть при завершении экспозиции, рыбки должны быть подвергнуты эвтаназии с
помощью раствора трикаина (трикаина метансульфонат, Metacain. MS 222 (CAS 886-86-2) в
концентрации от 100 до 500 мг/л, буферизованного с 300 мг/л NaHC03 (CAS 144-55-8).
предназначенного для снижения раздражения слизистой оболочки; затем собирают кровь и ткань для
определения вителлогенина.
5