ГОСТ 32429-2013
.
Процедура 2 В: Медака японская (Oryzias latipes). Предварительная подготовка печени
для анализа вителлогенина
Возьмите флакон, содержащий гомогенатный буфер из набора ELISA и охладите его с
измельченным льдом (температура раствора: s 4 еС). Если используется гомогенатный буфер из
набора EnBio ELISA, оставьте оттаять раствор при комнатной температуре, затем охладите флакон с
измельченным льдом.
Рассчитайте, объем гомогенатного буфера для печени, исходя из ее веса (используйте 50 мкл
буфера на мг веса печени для гомогенирования). Например, если вес печени 4.5 мг. объем буфера
составит 225 мкл. Подготовьте список необходимых объемов буфера для всех образцов печени.
Подготовка печени для предварительной обработки:
(1) Возьмите микропробирку на 1.5 мл. содержащую печень из морозильника перед
предварительной обработкой.
(2) Предварительная обработка печени самцов должна быть выполнена раньше самок, чтобы
предотвратить загрязнение вителлогенином.Кроме того,предварительная обработка для
тестируемых групп должна быть проведена в следующей последовательности: контроль, контроль
растворителя (если применимо), самая низкая концентрация, средняя концентрация, самая высокая
концентрация и положительный контроль.
(3) Число микропробирок на 1.5 мл. содержащих образцы печени, взятые из морозильника не
должно превысить число, которое можно центрифугировать.
(4) Установите микропробирки на 1,5 t/л. содержащие образцы печени в емкости со льдом в
последовательности проведения анализа (размораживание печени неважно).
Проведение предварительной обработки
1Добавьте гомогенатный буферный раствор
Проверьте список объемов гомогенатного буфера, которые будут использоваться для каждого
образца печени и выставьте микропипетку (диапазон объемов: от 100 до 1000 мкл) на
соответствующий объем. Присоедините чистый наконечник к микропипетке.
Возьмите гомогенатный буфер из флакона и добавьте буфер в микропробирку на 1.5 мл.
содержащую печень.
Добавьте гомогенатный буфер ко всем микропробиркам на 1.5 мл, содержащим печень
согласно процедуре, описанной выше. Нет никакой потребности менять наконечник микропипетки на
новый. Однако, если ее конец загрязнен или наконечник необходимо заменить.
2 Гомогенизация печени
(1) Присоедините новый пилон для гомогенизации к гомогенизатору микропробирки.
(2) Вставляйте пилон в микропробирку на 1,5
nut
Установите гомогенизатор для раздавливания
печени между поверхностью пилона и внутренней стенкой микропробирки на 1,5 мл.
24