ГОСТ 31926—2013
17.1 Хромогенный метод конечной точки (метод Е) основан на количественной зависимости кон
центрации эндотоксинов от количества хромофора, высвободившегося к концу инкубационного
периода.
17.2 Впроцессе испытанияхромогеннымкинетическим методом (метод D)измеряют время, необ
ходимоедля достижения предварительно определенной величины оптической плотности реакционной
смеси или скорости окрашивания.
Испытание проводят при температуре инкубирования, рекомендованной производителем
Л
А
Л
-реактива [обычно (37
±
1)°С].
18 Предварительные испытания
Для проверки точности или валидации испытания турбидиметрическим методом либо хромоген
ным методом проводят предварительные испытания, позволяющие убедиться в надежности критериев
для стандартной кривой ив том, что испытуемый раствор не является мешающим факторомдля
прове дения испытания.
Валидация методики испытаний необходима, если в условия эксперимента внесены какие-либо
изменения, которые могут повлиять на результаты испытания.
18.1 Проверка надежности критериев для стандартной кривой
Готовят не менее трехразведений растворастандартного препарата эндотоксинадля построения
стандартнойкривой. Проводятиспытание, используянеменеетрехпараллельныхрядов каждого разве
дения растворастандартногопрепаратаэндотоксина.всоответствиисрекомендациямипроизводителя
Л
А
Л
-реактива (объемные соотношения, время инкубирования, температура. pH и т. п.).
Если при проведениииспытания кинетическим методом необходимыйинтервалпревышает2лога
рифма. включают дополнительные разведения стандартного препарата эндотоксина, для того чтобы
разграничить каждое повышение логарифма на единицу в интервале значений стандартной кривой.
Абсолютное значение коэффициента корреляции |г|должно быть выше или равно 0,980для интервала
концентраций эндотоксинов, указанных производителем лизата.
18.2 Испытание на наличио мешающих факторов
Выбирают значение концентрации эндотоксинов, лежащее в середине интервала значений стан
дартной кривой или близкое кэтому значению. Готовят растворы А. В. СиD. как показано в таблице 5.
Т а б л и ц а 5 — Схема эксперимента «Мешающие факторы*
Раствор
Концентрация эндотоксинов
Раствор, к которому
добавлен эндотоксин
Количество повторностей
А
Отсутствует
Испытуемый раствор
Не менее 2
В
Средняя концентрация на стандартной
кривой
Испытуемый раствор
Не менее 2
С
Не менее трех концентраций (самую
низкую концентрацию обозначают >.)
Вода для
Л
А
Л
-теста
Каждая концентрация не менее 2
О
Отсутствует
Вода для
Л
А
Л
-теста
Не менее 2
П р и м е ч а н и я
1 Раствор А — испытуемый раствор, который следует разводить до значения, не превышающего МДР.
2 Раствор В — испытуемый образец в том же разведении, что и раствор А. содержащий прибавленные эндо
токсины в концентрации, равной значению средней концентрации на стандартной кривой или близкой к ней.
3 Раствор С — раствор стандарта эндотоксина в концентрациях, используемых при валидации метода, в со
ответствии с
18.1
(проверка надежности критериев для стандартной кривой (положительные контроли).
4 Раствор О — вода для
Л
А
Л
-теста (отрицательный контроль).
Проводят испытание не менее чем в двух параллельных пробах этих растворов в соответствии с
рекомендациями производителя лизата (объем испытуемого раствора и раствора лизата, объемное
соотношение испытуемого раствора и раствора лизата, время инкубирования ит. п.)
Вычисляют среднее значение количества добавленных эндотоксинов, вычитая среднюю концен
трацию эндотоксинов в растворе (если они присутствуют) изсредней концентрацииэндотоксинов в рас
творе. содержащемдобавленные эндотоксины.
14