ГОСТ 31926—2013
13.2 Проведение анализа
В круглодонные пробирки диаметром 10 мм вносят равные объемы
Л
А
Л
-реактива и испытуемого
раствора (по
0.1
cm
j ).
Реакционные смеси аккуратно перемешивают и инкубируют при температуре
(37
±
1)еС втечение (60 i 2) мин. Во время инкубированияследует избегатьвибрации и ударов. По исте
чении указанного срока визуально регистрируют результаты как положительные, так и отрицательные.
Положительная реакция (+)характеризуется образованием плотного геля, который не разрушается при
аккуратном однократном переворачивании пробирки на
180°.
Отрицательная реакция (-) характеризу
ется отсутствием такого геля.
13.2.1 Предварительные анализы
Для подтверждениядостоверности иточности результатов определения бактериальных эндоток
синов. проводимых с помощью
Л
А
Л
-реактива. необходимо подтвердить чувствительность реактива,
указанную на этикетке, а также убедиться в том. что испытуемое лекарственное средство не содержит
факторов, мешающих проведению реакции.
13.2.1.1 Подтверждение заявленной чувствительности
Л
А
Л
-реактива
Анализ проводят для каждой новой серии используемого
Л
А
Л
-реактива. а также при изменении
условийэксперимента, используемыхматериалов иреактивов, способныхповлиятьна результаттеста.
13.3 Проведение анализа
Для проведенияанализа готовят растворы СиОпо схеме, приведенной в таблице 1.
Т а б л и ц е 1 — Схема эксперимента «Подтверждение заявленной чувствительности
Л
А
Л
-реактива»
Раствор
Исходный раствор
Растворитель
Фактор
разведения
Конечная концентрация
КСЭ в испытуемой
растворе
Количество
повториостей
С
Вода для
Л
А
Л
-тес-
та
Раствор КСЭ в воде
для
Л
А
Л
-теста кон-
центрацией 2 к
1
2
4
8
2 к
1 к
0.5 X
0.25 к
4
4
4
4
D
Вода для
Л
А
Л
-теста
—
—
—
2
Растворы С — серия разведений КСЭ в воде для
Л
А
Л
-теста (проверка чувствительности
Л
А
Л
-реактива).
Раствор D — водадля
Л
А
Л
-теста (отрицательный контроль).
Опыт проводят, какописано в 13.2.
13.4 Обработка результатов
Анализ считаютдостоверным, еслидля раствора О (отрицательный контроль) во всех повторнос
тях получены отрицательные результаты; для раствора С концентрацией 0.25 /.получены отрицатель
ные результаты.
Конечной точкой реакции для каждой из повторностей растворов С является положительный
результат, полученныйдля раствора с наименьшей концентрацией КСЭ.
Среднегеометрическое значение чувствительности
Л
А
Л
-реактива Сксэ в конечной точке реакции
рассчитывают поформуле
Сксэ * antilog(6)
где Сксэ — концентрация контрольногостандарта эндотоксина;
у
в — сумма логарифмов концентраций КСЭ в конечной точке реакции в каждой из повторностей;
f — число повторностей.
Заявленная чувствительность
Л
А
Л
-реактива считается подтвержденной и используется в даль
нейших расчетах в том случае, если полученное в эксперименте значение чувствительности
Л
А
Л
-реак
тива от 0.5до 2,0/.
13.5 Мешающие факторы
Испытуемоелекарственноесредство можетсодержатьмешающиефакторы, усиливающие и(или)
ингибирующиереакцию
Л
А
Л
-реактивас бактериальнымиэндотоксинами. Обнаружитьэтиявлениямож
но. сравнив способность используемого
Л
А
Л
-реактива реагировать с раствором КСЭ в воде для
ю