ГОСТ I*51352-99
концентраций, от точности определения нулевой калибровочной пробы, от константы ассоциации
специфических антител (чем больше константа ассоциации, тем чувствительнее система для
радиоиммуноанализа), а также от значения соотношения скоростей счета калибровочной пробы с
минимальным содержанием определяемого антигена и нулевой калибровочной пробы.
Те cm на ->от крыт и е»
При постановке теста на «открытие* смешивают, как правило, равные объемы контрольной
сыворотки (плазмы) и калибровочной пробы. Вместо контрольной сыворотки (плазмы) можно
использовать калибровочную пробу с минимальной концентрацией определяемого вещества.
Тест на «открытие* 07’, %, проводят в восьми-десети повторностях. В исследуемой пробе
определяют концентрацию анализируемого антигена и сравнивают ее значение с расчетным по
формуле
О Г г -JLx 100.(&)
где Сп(| — полученное по калибровочному графику (практическое) значение концентрации анали
зируемого антигена в исследуемой пробе:
С, — расчетное (теоретическое) значение концентрации антигена в исследуемой пробе.
Значение «открытия* должно находиться в пределах 90-110%.
Тест на «открытие» является одним из основных для решения вопроса о специфичности и
правильности проведения анализа. Важность данного теста заключается также и в том, что при его
постановке сравнивают, как взаимодействуют анализируемый антиген, находящийся в исследуемой
пробе (например, в контрольной сыворотке или плазме), и анализируемый антиген, находящийся в
калибровочной пробе, с антителом. Если они взаимодействуют по-разному, что называется «мат-
риксным эффектом*, то появляются систематические ошибки и непостоянство результатов опреде
ления.
В случае экспериментальной проверки качества наборов, предназначенных для определения
антигена (антител) в сухих пятнах крови, тест на «открытие* не проводят.
Тест и а «линейность»
Этот тест заключается в последовательных разведениях калибровочной пробы с максимальной
концентрацией антигена или контрольной сыворотки (плазмы) с высокой концентрацией этого
антигена в 2, 4, 8 и т. д. раз (возможны и другие пропорции разведения) с последующим сравнением
полученных результатов с ожидаемыми при этих разведениях концентрациями анализируемого
антигена. Разведения должны быть выполнены с таким расчетом, чтобы тест охватывал все участки
калибровочного графика, поэтому наряду с максимальной калибровочной пробой можно использо
вать калибровочные пробы со средней и даже низкой концентрацией анализируемого вещества. Для
разведения следует использовать нулевую калибровочную пробу или сыворотку (плазму) крови, не
содержащую исследуемый антиген.
Тест на «линейность»Л, %. проводят в восьми-десяти повторностях. Ванализируемых образцах
определяют концентрацию исследуемого антигена, умножают на коэффициент разведения и срав
нивают ее значение с расчетным по формуле
Л = ^х 100,(7)
где Сор — полученное по калибровочному графику(практическое) значение концентрации анали
зируемого антигена в исследуемых пробах;
С, — расчетное (теоретическое) значение концентрации анализируемого антигена в исследу
емых пробах.
Значение «линейности* должно находиться в пределах 90—110 %.
Тест на «линейность» важен тем. что позволяет проконтролировать, насколько правильно
калиброваны калибровочные пробы относительнодругдруга. При разведении одной калибровочной
пробы идет сравнение этой пробы с калибровочными пробами, близкими по концентрации к
полученным результатам.
Тест на «линейность* позволяет устранить систематические ошибки, связанные с рахличной
специфичностью анализа, на каждой сталии калибровки, а также позволяет оценить правильность
работы системы для рад моиммунологического анализа на всех участках калибровочного графика.
6